人IL-1Ra基因真核表达载体的构建及体外转染大鼠骨髓间充质干细胞

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目的:构建人IL-1Ra真核表达载体,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BM—MSCs)。方法:从PHA活化的人外周血单个核细胞中提取总RNA,RT—PCR法获得hIL-1Ra cDNA,经HindⅢ、EcoR Ⅰ双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3。经酶切分析及PCR鉴定后,脂质体介导下体外转染大鼠BM—MSCs,免疫荧光法检测hIL-1Ra在大鼠MSCs的表达。结果:获得570bp大小的IL-1Rac DNA片段;经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序,证实IL-1Ra cDNA定向插入pcDNA3质粒
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