【摘 要】
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目的:观察Ca2+/calpain信号通路在纤连蛋白（FN）诱导MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化（EMT）中的作用。方法:以正常培养MCF-10A乳腺上皮细胞为实验对象。采用比色法检测细胞内Ca2+浓度
【机 构】
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贵州医科大学; 贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(编号:81560598、81302804);中国博士后基金(编号:2015M582759XB);贵阳市科技局项目(编号:筑科合同[20141001]);贵州省教育厅自然科学基金优秀人才计划(编号:黔教合KY字[2015]492);贵州省科学技术基金(编号:黔科合J字[2014]2007号);2016年度高层次创新型人才计划“千层次”(编号:71000305);贵州20
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目的:观察Ca2+/calpain信号通路在纤连蛋白（FN）诱导MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化（EMT）中的作用。方法:以正常培养MCF-10A乳腺上皮细胞为实验对象。采用比色法检测细胞内Ca2+浓度;采用荧光分光光度法检测钙蛋白酶-2（calpain-2）活性;Western blot法检测calpain-2、波形蛋白（vimentin）、E-钙黏着蛋白（E-cadherin）的表达;采用划痕修复实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:FN诱导MCF-10A细胞中Ca2+浓度、calpain-2活性表达明显升高,上调vimentin、calpain-2蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平;FN诱导MCF-10A细胞迁移和侵袭能力显著增强。钙离子螯合剂（BAPTA-AM）和氨氯地平（amlodipine）均能显著抑制FN诱导的细胞Ca2+浓度、calpain-2活性及表达升高;抑制vimentin蛋白表达上调及E-cadherin蛋白表达下调;抑制FN诱导MCF-10A细胞迁移和侵袭能力增强。结论:BAPTA-AM和Amlodipine均能够抑制FN诱导的上皮间质转化。FN能够诱导MCF-10A乳腺上皮细胞发生EMT,可能与Ca2+/calpain信号通路激活有关。
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