【摘 要】
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通过PCR扩增裂谷热病毒（RVFV） Gn蛋白胞外区（eGn）基因,连入原核表达载体pET-30a（+）,构建重组质粒pET-30a（+）-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21（DE3）,IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTM
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院; 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所; 吉林农业大学动物科学技术学院; 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室; 江苏
【基金项目】
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国家科技支撑计划基金资助项目(2015BAD12B04)
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通过PCR扩增裂谷热病毒（RVFV） Gn蛋白胞外区（eGn）基因,连入原核表达载体pET-30a（+）,构建重组质粒pET-30a（+）-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21（DE3）,IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTMFF蛋白纯化柱纯化目的蛋白。将目的蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,免疫荧光鉴定制备的单克隆抗体特性。结果显示,PCR扩增出1 287 bp的目的基因;构建的重组质粒转化BL21细胞后可有效表达目的蛋白,确定最佳表达条件为30℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,目的蛋白以包涵体形式表达;纯化后目的蛋白纯度为94.136%;制备的单克隆抗体可特异性识别哺乳动物细胞表达的Gn蛋白,表明RVFV eGn蛋白具有良好的免疫原性。研究结果为裂谷热新型疫苗和快速诊断试剂的研制奠定基础。
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