探讨褪黑素联合顺铂促进大鼠胰腺癌AR42J细胞凋亡的机制。
方法将大鼠胰腺癌AR42J细胞分为对照组、1 mmol/L顺铂处理组(顺铂组)、1 mmol/L褪黑素处理组(褪黑素组)、1 mmol/L顺铂加1 mmol/L褪黑素联合处理组(联合组)、1 μmol/L PBN预处理1 h后顺铂加褪黑素联合处理组(PBN＋联合组)、PBN溶剂预处理1 h后顺铂加褪黑素联合处理组(溶剂＋联合组)。采用MTT法检测细胞的增殖率，Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡，蛋白质印迹法检测细胞caspase-3蛋白表达水平，DCFH-DA法检测细胞活性氧自由基(ROS)水平。检测ROS拮抗剂PBN预处理24 h后AR42J细胞内ROS水平和caspase-3表达量。
结果对照组、顺铂组、褪黑素组、联合组细胞培养24 h后的细胞增殖率分别为(96.29±3.49)%、(81.38±6.01)%、(80.72±3.68)%、(42.26±6.35)%；细胞凋亡率分别为(16.42±4.15)%、(56.47±9.06)%、(52.94±6.57)%、(87.36±6.48)%；ROS阳性细胞占比分别为(1.33±1.53)%、(46.67±7.64)%、(45.67±5.13)%、(83.33±7.64)%；caspase-3表达量分别为100%、(150.64±7.70)%、(147.00±7.27)%、(190.04±5.07)%。顺铂组、褪黑素组的细胞增殖率较对照组均显著降低，细胞凋亡率、ROS阳性细胞占比、caspase-3蛋白表达量均较对照组显著升高；联合组的变化又较单药处理组进一步加重，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。应用PBN预处理联合组细胞1 h后可显著逆转褪黑素联合顺铂处理所致的ROS阳性AR42J细胞百分率[(45.24±4.64)%比(84.90±6.13)%]，下调AR42J细胞的caspase-3表达量[(124.92±9.72)%比(184.69±7.76)%]，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。
结论褪黑素联合顺铂可能通过ROS/caspase-3通路促进大鼠胰腺癌AR42J细胞的凋亡