【摘 要】
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目的构建新生隐球菌H99细胞酵母双杂交cDNA文库,为后续深入研究新生隐球菌的蛋白功能以及病原-宿主相互作用机制奠定基础。方法提取对数生长中期的隐球菌细胞mRNA,以5’端标
【机 构】
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上海东方肝胆外科医院皮肤科,上海东方肝胆外科医院内科教研室,上海长征医院皮肤科,上海市第十人民医院急诊科
【基金项目】
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国家自然科学基金(81772159),上海市医学真菌分子生物学重点实验室开放基金(20160001)
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目的构建新生隐球菌H99细胞酵母双杂交cDNA文库,为后续深入研究新生隐球菌的蛋白功能以及病原-宿主相互作用机制奠定基础。方法提取对数生长中期的隐球菌细胞mRNA,以5’端标记有Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库。结果入门文库总容量为1.13×10^7 CFU,阳性率为90.63%。表达文库总容量为1.25×10^7 CFU,阳性率100%。结论构建的
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