【摘 要】
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目的:体外观察三七总皂苷(tPNS)对过氧化氢(H2O2)诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响,并通过ERK1/2通路初步探讨tPNS的作用分子机制.方法:全骨髓贴壁法体外分离、培养SD大鼠BMSCs.不同浓度tPNS (25、50、100和200μg/mL)处理BMSCs 24 h后,用500μmol/L H2O2孵育细胞24 h诱导凋亡,后行MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期.100 μg/mL tPNS预处理24 h后,加ERK1/2抑制剂PD98059(25 μmol/L)1
【机 构】
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湖州市第三人民医院药剂科,浙江湖州313000;贵州中医药大学第二附属医院中心实验室,贵州贵阳550000
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目的:体外观察三七总皂苷(tPNS)对过氧化氢(H2O2)诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响,并通过ERK1/2通路初步探讨tPNS的作用分子机制.方法:全骨髓贴壁法体外分离、培养SD大鼠BMSCs.不同浓度tPNS (25、50、100和200μg/mL)处理BMSCs 24 h后,用500μmol/L H2O2孵育细胞24 h诱导凋亡,后行MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期.100 μg/mL tPNS预处理24 h后,加ERK1/2抑制剂PD98059(25 μmol/L)1h,后用500μmol/LH2O2孵育细胞24 h诱导凋亡,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞ERK1/2及其蛋白磷酸化的表达.结果:与对照组比较,其他各组存活率均显著降低(P＜0.01);与H2O2组比较,100μg/mL和200μg/mL tPNS组均能显著提高BMSCs的存活率(P＜0.01,P＜0.05),其中100 μg/mL效果更佳,所以采用最佳浓度组100 μg/mL tPNS组进行后期研究.BMSCs经tPNS干预24 h后,100 μg/mL和200 μg/mL tPNS组细胞周期中G2+S期细胞数的比例较H2O2组明显增加(P＜0.05),其中100 μg/mL tPNS组较200 μg/mL tPNS组更多;其他浓度tPNS组与H2O2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,其他各组凋亡率均升高(P＜0.01);与H2O2组比较,tPNS组能显著降低BMSCs的凋亡率(P＜0.01);与tPNS组比较,tPNS+PD98059组能显著升高BMSCs的凋亡率(P＜0.05).与对照组比较,H2O2组、tPNS+PD98059组能显著下调ERK1/2蛋白的磷酸化表达(P＜0.01);与H2O2组比较,tPNS组、tPNS+PD98059组能显著上调ERK1/2蛋白的磷酸化表达(P＜0.01);tPNS组与tPNS+PD98059组之间并没有显著差异.结论:tPNS对H2O2诱导的BMSCs凋亡有保护作用,其机制可能与促进ERK1/2蛋白的磷酸化表达有关.
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