【摘 要】
：
目的 分析核糖核酸结合基序蛋白5 (RBM5)基因对人肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)获得性耐药的影响及作用机制.方法 采用低浓度吉非替尼逐步加量诱导法筛选人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株A549/GR.RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞RBM5表达水平;构建RBM5过表达重组质粒,建立稳定过表达RBM5的A549/GR细胞系;检测A549/GR细胞系中RBM5过表达重组质粒转染效率;采用光学显微镜检测过表达RBM5对A549/GR细胞形态变化的影响;采用CCK8实验检测过表达RB
【机 构】
：
中国医科大学附属第一医院胸外科,辽宁沈阳110001
论文部分内容阅读
目的 分析核糖核酸结合基序蛋白5 (RBM5)基因对人肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)获得性耐药的影响及作用机制.方法 采用低浓度吉非替尼逐步加量诱导法筛选人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株A549/GR.RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞RBM5表达水平;构建RBM5过表达重组质粒,建立稳定过表达RBM5的A549/GR细胞系;检测A549/GR细胞系中RBM5过表达重组质粒转染效率;采用光学显微镜检测过表达RBM5对A549/GR细胞形态变化的影响;采用CCK8实验检测过表达RBM5对A549/GR细胞EGFR-TKI敏感性的影响,同时筛选IC50,检测过表达RBM5对A549/GR细胞增殖活性的影响.分别采用细胞划痕实验、Transwell实验、流式细胞周期实验、TUNEL染色实验、Annexin V-FITC流式细胞凋亡及蛋白质印迹法实验检测过表达RBM5对A549/GR细胞运动、迁移、侵袭、周期分布和凋亡的影响.结果 与A549细胞比较,人肺腺癌耐药株细胞A549/GR中RBM5基因[(1.000±0.031)vs(0.424±0.054),t=12.327,P=0.021]和蛋白[(1.000±0.022)vs (0.531±0.032),t=11.173,P=0.017]均呈低表达.与转染空载质粒pcDNA3.1和空白对照组的A549/GR细胞比较,转染pcDNA3.1-RBM5质粒的A549/GR细胞中,RBM5基因(12.326±2.337,F=14.328,P=0.034)和蛋白(2.433±0.044,F=7.302,P=0.042)均呈高表达.与A549细胞比较,A549/GR细胞增殖旺盛,细胞核分裂象清晰,细胞对吉非替尼的IC50较高;转染pcDNA3.1-RBM5质粒过表达RBM5后,A549/GR细胞生长缓慢,细胞形态不规则,核仁固缩明显,细胞对吉非替尼的IC50降低,细胞增殖活性降低.与A549/GR组细胞及pcDNA3.1组细胞比较,pcDNA3.1-RBM5组细胞运动、迁移和侵袭能力明显降低,G1期细胞比例(F=12.328,P=0.018)和细胞凋亡率(F=21.428,P=0.011)均明显升高;凋亡抑制相关蛋白Bcl-2表达水平明显降低(F=11.324,P=0.023),促凋亡蛋白Bax(F=113.242,P=0.043)、Caspase-3 (F=21.424,P=0.002)和Caspase-9 (F=14.459,P=0.024)表达水平则明显升高,组间差异有统计学意义.结论 RBM5在人肺腺癌EGFR-TKI获得性耐药株中呈低表达,过表达RBM5可通过阻滞细胞周期影响细胞活性,激活Caspase细胞凋亡信号通路,逆转细胞对吉非替尼的耐药.
其他文献
慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是临床上一种十分常见的慢性呼吸道疾病,其特征为持续的呼吸道症状和不完全可逆气流限制[1].研究显示,全球患有COPD的人数超过2.5亿人,给经济带来了沉重负担[2].为此,临床工作者一直探索可以反映COPD患者病情严重程度或预后情况的指标,旨在辅助针对性治疗,减少医疗资源浪费,从而改善患者预后.近年来,有研究报道中性粒细胞百分比与白蛋白比值(neutrophil per?centage-to-albumi
小脑梗死症状缺乏特异性,容易出现误诊或漏诊.若梗死面积大,容易导致脑积水或者脑干受压,其病死率非常高.所以小脑梗死的早期诊断、早期治疗,对于防止各类严重并发症和改善患者的预后具有重要意义.本次研究选择61例经过颅脑磁共振确诊的小脑梗死患者作为研究对象,对其临床症状、体征、并发症和不同供血动脉受累的病因与预后情况进行探讨,旨在探讨急性小脑梗死患者的颅脑磁共振信息与病因、预后的关系.现报道如下.
肺磨玻璃结节中高达59％～73％为恶性,应积极处理.目前,胸腔镜手术用于肺结节治疗已经得到公认[1].然而结节的定位问题一直是临床难点.CT引导下钩丝定位技术近年来逐渐应用于胸腔镜肺结节切除术的术前定位,并起到了重要作用[2],具有定位准确率高、定位时间短、切除准确率高和术后并发症发生率低的特点[3].CT引导下钩丝定位是一项有创操作,在操作过程中引起的气胸、出血、胸膜反应等并发症也需提高警惕[4],尤其是严重胸膜反应,患者会出现休克及呼吸心跳骤停,甚至死亡.本次研究探讨肺结节钩丝定位术所致胸膜反应的相关
血液资源十分宝贵.来自无偿献血的全血通过分离制备产生血浆和悬浮红细胞等血液成分,临床上根据不同疾病和症状进行成分输血,其中人工肝、血浆置换、严重烧伤等患者的救治需要大量血浆.目前供血与临床用血供需处于紧平衡状态.在血液制备过程中,工作人员需按相关规定对血液外观严格目视检查,当有重度乳糜、不足量等情况应判定为不合格血浆报废处理.本次研究调查分析了近几年中心制备过程不合格血浆情况,并结合从血液招募、初筛、采集、制备等环节采取相应措施,有效地降低了血浆不合格率,对保障血液供应和提高血液安全具有重要意义.现报道如
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmo?nary disease,COPD)是一种发病率随年龄而增涨的常见呼吸系统病种,系老年群体心身健康与生存质量之主要负效应影响因子之一[1].对于出院后居家康养的稳定期COPD者而言,长期家庭氧疗联合科学康复训练是其病情获改善、生活质量获得提升的重要措施[2,3],但受漫长病程、氧疗与康复训练价值认知认同度不足等的影响,大量COPD稳定期患者处于家庭氧疗与康复训练低依从性状态[4],有必要以积极见效的院外延续护理来解决其健康管理行为的低依
冠心病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病.高脂血症与冠心病的发生、发展密切相关,有研究表明低密度脂蛋白与冠心病呈明显相关[1].Hirakawa等[2]研究指出高甘油三酯(triglyceride,TG)水平会加重冠心病的发生风险.麝香通心滴丸具有芳香开窍、益气温阳、理气止痛之功效,对冠心病和心绞痛疗效好,但对冠心病患者血脂的临床研究尚无报道.本次研究将观察麝香通心滴丸对冠心病患者血脂代谢的影响,旨在评价其新的临床药效作用.现报道如下.
孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder, ASD)是儿童神经发育障碍性疾病,目前尚无特效疗法,多采用特殊教育训练、神经生理、认知行为干预等综合性治疗,以尽可能改善患儿行为问题,减轻家庭照顾与经济负担[1].经颅磁刺激是治疗ASD的重要手段,能够通过调节大脑皮层兴奋性,纠正临床症状,在改善选择性注意缺陷、减少行为问题、提高执行力方面取得显著效果,得到临床普遍认可[2,3].此外,针灸作为中医重要组成部分,在神经系统疾病治疗中作用日益突出.中医将ASD归于“呆病”、“语迟”范畴,肾精
髋部骨折是常见的老年脆性骨折.既往研究显示,老年患者髋部骨折术后1年致残率高达50％,病死率可达30％[1,2].术前对老年患者进行评估,对于临床治疗方案的决策及术后并发症的预测都有重要意义.近年来提出用改良衰弱指数(modified frailty index,mFI)量化手术老年个体的衰弱程度.mFI是一种多维度的综合评估方法,可更全面、系统地了解患者状况,并可预测住院时间及预后[3,4],对临床治疗方案的决策有重要意义.本次研究回顾性分析103例髋部骨折手术老年患者的临床资料,探讨mFI与老年髋部骨
目的 检测肺癌细胞中WW结构域E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)表达,并探讨敲低WWP1表达对肺癌SPC-A1细胞增殖和侵袭能力影响机制.方法 利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测肺癌细胞SPC-A1、H1299及正常肺上皮细胞BEAS-2B中WWP1和PTEN表达;WWP1 siRNA转染SPC-A1肺癌细胞以敲低WWP1表达,分为si-NC组,siWWP1#1组及siWWP1#2组,利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞WWP1和PTEN表达,通过Tran
目的 通过数据库挖掘,深入探讨血管内皮生长因子A(VEGFA)在结直肠癌中的表达及意义.方法 通过On-comine数据库提取VEGFA在结直肠癌组织和正常组织中的表达数据,采用OncoLnc数据库提取VEGFA预后信息,分析VEGFA表达水平与结直肠癌预后关系;采用CCLE数据库提取VEGFA在结直肠癌细胞中的表达数据,采用String网站获取VEGFA共表达分子并绘制VEGFA共表达网络.结果 Oncomine数据库中共收集452项不同类型的研究结果,差异有统计学意义的研究结果有64项,表达上调的研究