酿酒酵母CICC1747醛糖还原酶基因的克隆及表达

来源 :生物加工过程 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xgimi1985

【摘要】

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采用PCR技术以酿酒酵母CICC1747基因组DNA为模板扩增得到醛糖还原酶基因GRE3，插入到pET-15b载体的Nde Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点之间，构建了酿酒酵母醛糖还原酶原核表达载体pET-15b-

【作者】

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曹丹燕李艳张清许琳严明

【机构】

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南京工业大学制药与生命科学学院

【出处】

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生物加工过程

【发表日期】

：

2006年2期

【关键词】

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酿酒酵母 GRE3基因醛糖还原酶克隆表达 S. cerevisiae GRE3 gene aldose reductase clone expressi

【基金项目】

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国家“973”项目（2003CB716000）,国家自然科学重点基金项目（20336010）资助.

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采用PCR技术以酿酒酵母CICC1747基因组DNA为模板扩增得到醛糖还原酶基因GRE3，插入到pET-15b载体的Nde Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点之间，构建了酿酒酵母醛糖还原酶原核表达载体pET-15b-GRE3。将该载体转化到大肠杆菌菌株Rosetta（DE3）中，重组菌株用IPTG诱导表达，采用紫外分光光度法测定醛糖还原酶活力，并对其表达条件进行初步优化。SDS-PAGE电泳结果显示在分子量约37kD处有明显的特异性蛋白质条带。发酵液的比酶活最高为54．94mU／mg，与酿酒酵母野生菌株相比提高了近

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