【摘 要】
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目的:构建表达Bcl-XL小发夹RNA的腺病毒载体(Ad/Bcl-XL shRNA)并探讨其抗肿瘤作用。方法:构建、纯化重组腺病毒Ad/Bcl-XL shRNA。通过Western blotting、MTT分析验证它对Bcl-
【机 构】
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空军杭州航空医学鉴定训练中心内科,浙江大学医学院附属邵逸夫医院肛肠外科,
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目的:构建表达Bcl-XL小发夹RNA的腺病毒载体(Ad/Bcl-XL shRNA)并探讨其抗肿瘤作用。方法:构建、纯化重组腺病毒Ad/Bcl-XL shRNA。通过Western blotting、MTT分析验证它对Bcl-XL的下调及其杀伤肿瘤细胞的作用,并检测其处理后细胞凋亡信号的活化情况;在裸鼠皮下荷瘤模型中验证其体内抗肿瘤作用。结果:成功构建和纯化了Ad/Bcl-XLshRNA,它能显著下调结肠癌DLD1细胞Bcl-XL蛋白的表达;与Ad/GFP、PBS组相比,Ad/Bcl-XL shRNA组明显抑制人结肠癌细胞DLD1的生长[1 000 MOI时(60.6±4.8)%vs(99.0±2.6)%、100%;2 000 MOI时,(37.3±6.9)%vs(99.0±2.1)%、100%,P<0.01],但对正常人成纤维细胞无明显抑制作用(P>0.05);Ad/Bcl-XL shRNA组能有效诱导结肠癌细胞中凋亡信号casepase-9、casepase-3、PARP的活化。在裸鼠荷瘤模型中,与Ad/GFP、PBS组相比,Ad/Bcl-XL shRNA组显著抑制DLD1来源皮下肿瘤的生长[第29天时,(250.1±185.7)vs(880.0±286.1)、(911.0±389.1)mm3;P<0.01]。结论:Ad/Bcl-XLshRNA能显著抑制结肠癌细胞在体内外的生长,其在结肠癌治疗中具有潜在的应用价值。
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