【摘 要】
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克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列,并进行分泌表达.从人心肌组织提取总RNA,经逆转录得到cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增目的条带,重新设计上游引物,用相同PCR程序完成点
【机 构】
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中国药科大学生物技术中心,东南大学附属中大医院检验科
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克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列,并进行分泌表达.从人心肌组织提取总RNA,经逆转录得到cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增目的条带,重新设计上游引物,用相同PCR程序完成点突变;突变后PCR产物克隆入Pfd5载体,并用PCR、SpeI+YhoI双酶切、载体测序等方法鉴定;用ITPG诱导cTnI的表达.PCR扩增出630 bp左右条带,Pfd5-cTnI融合表达载体用PCR、SpeI+XhoI双酶切均可见630bp左右条带,测序结果与预期序列一致;诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原活性.人心肌肌钙蛋白I得到成功表达.
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