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【摘要】目的探讨Paxillin在胃癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测了10例正常胃组织,10例胃不典型增生组织及50例胃癌术后标本中Paxillin表达。所有病例都随访两年。结果正常胃、胃增生和胃癌组织间Paxillin表达存在非常显著性差异;不同淋巴结转移状况的胃癌中Paxillin表达程度有显著性差异(P=0.018);不同Paxillin蛋白表达的患者两年内转移发生率存在显著性差异(P=0.024)。结论Paxillin可能作为胃癌早期转移的指标,并用此判断预后。
【关键词】
Paxillin;胃癌;免疫组化
胃癌是我国恶性肿瘤发病率和死亡率最高的肿瘤之一,其转移过程是复杂的,探究胃癌侵袭转移的相关因子,对于胃癌转移的临床诊断和治疗具有重要意义。Paxillin是近年来发现的一种信号衔接蛋白(signal adaptor protein),主要存在于粘附斑,构成细胞与细胞外基质局部粘附关键部位。在细胞骨架与细胞外基质的粘附及细胞信息传导起重要作用,组织细胞中Paxillin表达的情况可反映有关的粘附动力学变化,对它的测定可反映癌细胞的侵袭转移能力[1]。本文拟通过免疫组织化学方法,10例正常胃组织,10例胃不典型增生组织及50例胃癌术后标本中Paxillin表达,并探讨这些表达与胃癌生物学行为的关系。
1资料与方法
1.1一般资料本研究50例胃癌标本来源于2006年7月至2007年7月间山西省汾阳医院收治的临床病历资料完整的胃癌术后标本,年龄33~72岁,所有病例术前均未进行放疗和化疗。具体构成为:肿瘤侵及肌层以内者23例,肿瘤侵及浆膜层者者27例;有淋巴结转移者31例,无淋巴结转移者19例;病理分级Ⅰ级14例,Ⅱ级20例,Ⅲ级16例。另收集同时期正常胃组织标本10例,胃不典型增生10例。
1.2试剂和方法鼠抗人Paxillin单克隆抗体购自美国NeoMarker公司,S-P染色及DAB试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司,免疫组化染色前行常规HE染色,用于病理诊断、分型、分级。免疫组化染色采用SP法,标本用10%福尔马林固定,石蜡包埋,组织切片4 μm厚,置于涂有防脱片剂多聚赖氨酸的载玻片上,放入60℃烤箱2 h,常规脱蜡至水,用EDTA热修复抗原,加过氧化物酶阻断剂封闭内源性过氧化物酶;血清封闭,加入一抗(抗Paxillin单克隆抗体)4℃冰箱过夜,生物素化二抗、辣根酶标记链霉卵白素复合物室温下各作用30 min,二氨联苯胺(DAB)显色,苏木素复染,常规脱水、透明、封片。阴性对照用PBS代替一抗。所有患者都随访两年,每3个月全面检查1次。
1.3阳性结果判定Paxillin蛋白阳性染色为在细胞膜和细胞浆中呈现黄色或棕色颗粒,境界清楚,无明显背景染色。蛋白表达评估标准[2]:①按染色强度计分:0分为无色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为黄褐色;②按阳性染色细胞百分率计分:高倍镜下每张切片选择10个有代表性的视野,每个视野计数 100 个肿瘤细胞,共计数1000个细胞。阳性细胞数≤10%为0分,阳性细胞数10%~25%为1分,25%~50%为2分,>50%为3分。将①×②的结果分为以下等级:0分为阴性(-),1~2分为弱阳性(+),3~4分为阳性(++),大于5分为强阳性(+++)。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别观察每例切片所得的平均分数来判定的。
1.4统计学分析所有数据经SPSS10.0 统计软件处理分析,应用χ2检验和确切概率计算法检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
免疫组化实验结果见表1。Paxillin蛋白阳性染色为在细胞膜和细胞浆中呈现黄色或棕色颗粒。正常胃、胃不典型增生和胃癌组织间Paxillin的表达存在非常显著性差异。不同淋巴结转移状况的胃癌间Paxillin表达程度差异有统计学意义(P=0.018)。
随访结果见表2,不同Paxillin蛋白表达的患者两年内转移发生率差异有统计学意义(P=0.024)。
表1
Paxillin表达与胃癌病理参数的关系
例数
Paxillin表达
++++++
阳性率%P确切概率
病理分型
正常胃1010010.0
胃不典型增生1021030.0
胃癌5012141582.00.001
肿瘤侵及深度
侵及肌层以内2346878.3
侵及浆膜层2788785.10.718
淋巴结转移
无1944463.1
有318101193.50.018
病理分级
Ⅰ级1433578.5
Ⅱ级2057480.0
Ⅲ级1644687.50.786
表2
不同Paxillin蛋白表达的胃癌患者两年内远处
转移发生率
不同Paxillin表达有转移无转移转移率(%)P确切概率
阳性212051.20.024
阴性2722.2
3讨论
Paxillin蛋白是近年来发现的一种重要的细胞黏附因子,人类Paxillin基因定位于染色体12q24。Paxillin 是一种68~70 kDa的的局部粘附蛋白,由src癌基因在细胞内转化,含磷酸酪氨酸的蛋白质,在细胞外基质和肌动蛋白细胞骨架之间形成一个结构性连接,同时也是细胞信号传导的重要位点即一个信号结合蛋白。它是与细胞外基质蛋白质如纤连蛋白、胶原和层粘蛋白的接合而激活的整合素的信号[3]。Paxillin集中在细胞内部各分散结构中称为局部粘连剂,这些结构又与细胞外基质有关系。Paxillin的酪氨酸磷酸化可以在整合素(依赖)的细胞与细胞外基质蛋白连接时观测到,在整合素调节的信号传递时Paxillin被修饰。Paxillin当前的一些观点是,一个局部粘合连接的信号分子,它作为一个连接蛋白使许多骨架蛋白和信号蛋白复杂化,并传到下游信号。Paxillin 蛋白在多种肿瘤中高表达,且目前研究表明,Paxillin 的表达量与肿瘤侵袭性、转移潜能呈正相关。其机制主要有以下几个[4]:①Paxillin与细胞表面受体分子相互作用;②Paxillin影响细胞黏附功能;③Paxillin作为细胞-细胞间通讯连接的组织蛋白影响细胞-细胞间连接的形成;④ Paxillin介导细胞信号转导。在本研究中,Paxillin在正常胃和胃不典型增生中表现为阴性或弱阳性,未见强阳性出现,而在胃癌中表达明显增强,阳性表达率达82%;在淋巴结转移病例与未转移病例间差异有统计学意义。已有实验证实,Paxillin 在多种肿瘤如结肠癌,肝癌,肺癌等中高表达,在肿瘤侵袭前缘表达增强,转移灶表达明显高于原发灶,与肿瘤转移潜能正相关[5-7]。结合本实验结果,Paxillin的表达主要与胃癌的转移关系密切,与肿瘤深度、病理分级关系不大,因此可认为,明显的Paxillin表达预示着有较高的淋巴结转移机率。可以考虑将Paxillin作为一个胃癌转移的指标。另外下一步还可以继续研究Paxillin是否是肿瘤转移的主要原因,并为抑制肿瘤转移找到可行之路。
现在胃癌的病因问题并未解决,故真正应用于一级预防的手段极为有限。有效的开展胃癌的二级预防则可以起到改善胃癌预后和降低死亡率的作用。当前在胃癌的治疗方面,已经不仅仅满足于怎么样的手术、放化疗了,更多的是要求较早的提供与肿瘤发展有关的信息,为个体化治疗提供有效的依据,通过多种检测来判断患者的预后,进而对有高度复发和转移危险的病例选择适当的辅助治疗,以提高治愈率[8]。本研究已初步提示,Paxillin表达主要与胃癌的转移密切相关,因此可以考虑把Paxillin蛋白作为早期转移的指标,并用此判断预后。此外,在今后的研究中我们可试用对此进行基因重组和基因敲除以阻断侵袭与转移的发生,并为药物开发和基因治疗带来信心。可以预见,Paxillin有望成为预测肿瘤侵袭转移、指导治疗及评估预后的有效指标。
参考文献
[1]David A,Michael C,Christopher E.The paxillin LD motifs.FEBS Letters,2002,513:114-118.
[2]许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准.中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.
[3]Turner CE.Paxillin interactions.Cell Sci,2000,113(23):4139-4140.
[4]Satrler M,Pisick E,Morrison PT,et al.Role of the cytoskeletal protein paxillin in oncogenesis.Crit Rev Oncog,2000,11(1):63-76.
[5]左万里,李海刚.非小细胞肺癌组织中CD44v6和Paxillin的表达及其与预后的关系.四川大学学报,2003,34(3):484-485.
[6]李海刚,谢德荣,黎洪浩,等.肝细胞癌Paxillin和VEGF的表达及其临床意义.中国肿瘤临床,2004,31(7):412-413.
[7]张诗武,刘岩雪,赵秀兰,等.100例伴转移的结直肠癌多因素预后分析.天津医科大学学报,2004,10(4):535-538.
[8]汤钊猷.现代肿瘤学.上海医科大学出版社,2000:850-856.
【关键词】
Paxillin;胃癌;免疫组化
胃癌是我国恶性肿瘤发病率和死亡率最高的肿瘤之一,其转移过程是复杂的,探究胃癌侵袭转移的相关因子,对于胃癌转移的临床诊断和治疗具有重要意义。Paxillin是近年来发现的一种信号衔接蛋白(signal adaptor protein),主要存在于粘附斑,构成细胞与细胞外基质局部粘附关键部位。在细胞骨架与细胞外基质的粘附及细胞信息传导起重要作用,组织细胞中Paxillin表达的情况可反映有关的粘附动力学变化,对它的测定可反映癌细胞的侵袭转移能力[1]。本文拟通过免疫组织化学方法,10例正常胃组织,10例胃不典型增生组织及50例胃癌术后标本中Paxillin表达,并探讨这些表达与胃癌生物学行为的关系。
1资料与方法
1.1一般资料本研究50例胃癌标本来源于2006年7月至2007年7月间山西省汾阳医院收治的临床病历资料完整的胃癌术后标本,年龄33~72岁,所有病例术前均未进行放疗和化疗。具体构成为:肿瘤侵及肌层以内者23例,肿瘤侵及浆膜层者者27例;有淋巴结转移者31例,无淋巴结转移者19例;病理分级Ⅰ级14例,Ⅱ级20例,Ⅲ级16例。另收集同时期正常胃组织标本10例,胃不典型增生10例。
1.2试剂和方法鼠抗人Paxillin单克隆抗体购自美国NeoMarker公司,S-P染色及DAB试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司,免疫组化染色前行常规HE染色,用于病理诊断、分型、分级。免疫组化染色采用SP法,标本用10%福尔马林固定,石蜡包埋,组织切片4 μm厚,置于涂有防脱片剂多聚赖氨酸的载玻片上,放入60℃烤箱2 h,常规脱蜡至水,用EDTA热修复抗原,加过氧化物酶阻断剂封闭内源性过氧化物酶;血清封闭,加入一抗(抗Paxillin单克隆抗体)4℃冰箱过夜,生物素化二抗、辣根酶标记链霉卵白素复合物室温下各作用30 min,二氨联苯胺(DAB)显色,苏木素复染,常规脱水、透明、封片。阴性对照用PBS代替一抗。所有患者都随访两年,每3个月全面检查1次。
1.3阳性结果判定Paxillin蛋白阳性染色为在细胞膜和细胞浆中呈现黄色或棕色颗粒,境界清楚,无明显背景染色。蛋白表达评估标准[2]:①按染色强度计分:0分为无色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为黄褐色;②按阳性染色细胞百分率计分:高倍镜下每张切片选择10个有代表性的视野,每个视野计数 100 个肿瘤细胞,共计数1000个细胞。阳性细胞数≤10%为0分,阳性细胞数10%~25%为1分,25%~50%为2分,>50%为3分。将①×②的结果分为以下等级:0分为阴性(-),1~2分为弱阳性(+),3~4分为阳性(++),大于5分为强阳性(+++)。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别观察每例切片所得的平均分数来判定的。
1.4统计学分析所有数据经SPSS10.0 统计软件处理分析,应用χ2检验和确切概率计算法检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
免疫组化实验结果见表1。Paxillin蛋白阳性染色为在细胞膜和细胞浆中呈现黄色或棕色颗粒。正常胃、胃不典型增生和胃癌组织间Paxillin的表达存在非常显著性差异。不同淋巴结转移状况的胃癌间Paxillin表达程度差异有统计学意义(P=0.018)。
随访结果见表2,不同Paxillin蛋白表达的患者两年内转移发生率差异有统计学意义(P=0.024)。
表1
Paxillin表达与胃癌病理参数的关系
例数
Paxillin表达
++++++
阳性率%P确切概率
病理分型
正常胃1010010.0
胃不典型增生1021030.0
胃癌5012141582.00.001
肿瘤侵及深度
侵及肌层以内2346878.3
侵及浆膜层2788785.10.718
淋巴结转移
无1944463.1
有318101193.50.018
病理分级
Ⅰ级1433578.5
Ⅱ级2057480.0
Ⅲ级1644687.50.786
表2
不同Paxillin蛋白表达的胃癌患者两年内远处
转移发生率
不同Paxillin表达有转移无转移转移率(%)P确切概率
阳性212051.20.024
阴性2722.2
3讨论
Paxillin蛋白是近年来发现的一种重要的细胞黏附因子,人类Paxillin基因定位于染色体12q24。Paxillin 是一种68~70 kDa的的局部粘附蛋白,由src癌基因在细胞内转化,含磷酸酪氨酸的蛋白质,在细胞外基质和肌动蛋白细胞骨架之间形成一个结构性连接,同时也是细胞信号传导的重要位点即一个信号结合蛋白。它是与细胞外基质蛋白质如纤连蛋白、胶原和层粘蛋白的接合而激活的整合素的信号[3]。Paxillin集中在细胞内部各分散结构中称为局部粘连剂,这些结构又与细胞外基质有关系。Paxillin的酪氨酸磷酸化可以在整合素(依赖)的细胞与细胞外基质蛋白连接时观测到,在整合素调节的信号传递时Paxillin被修饰。Paxillin当前的一些观点是,一个局部粘合连接的信号分子,它作为一个连接蛋白使许多骨架蛋白和信号蛋白复杂化,并传到下游信号。Paxillin 蛋白在多种肿瘤中高表达,且目前研究表明,Paxillin 的表达量与肿瘤侵袭性、转移潜能呈正相关。其机制主要有以下几个[4]:①Paxillin与细胞表面受体分子相互作用;②Paxillin影响细胞黏附功能;③Paxillin作为细胞-细胞间通讯连接的组织蛋白影响细胞-细胞间连接的形成;④ Paxillin介导细胞信号转导。在本研究中,Paxillin在正常胃和胃不典型增生中表现为阴性或弱阳性,未见强阳性出现,而在胃癌中表达明显增强,阳性表达率达82%;在淋巴结转移病例与未转移病例间差异有统计学意义。已有实验证实,Paxillin 在多种肿瘤如结肠癌,肝癌,肺癌等中高表达,在肿瘤侵袭前缘表达增强,转移灶表达明显高于原发灶,与肿瘤转移潜能正相关[5-7]。结合本实验结果,Paxillin的表达主要与胃癌的转移关系密切,与肿瘤深度、病理分级关系不大,因此可认为,明显的Paxillin表达预示着有较高的淋巴结转移机率。可以考虑将Paxillin作为一个胃癌转移的指标。另外下一步还可以继续研究Paxillin是否是肿瘤转移的主要原因,并为抑制肿瘤转移找到可行之路。
现在胃癌的病因问题并未解决,故真正应用于一级预防的手段极为有限。有效的开展胃癌的二级预防则可以起到改善胃癌预后和降低死亡率的作用。当前在胃癌的治疗方面,已经不仅仅满足于怎么样的手术、放化疗了,更多的是要求较早的提供与肿瘤发展有关的信息,为个体化治疗提供有效的依据,通过多种检测来判断患者的预后,进而对有高度复发和转移危险的病例选择适当的辅助治疗,以提高治愈率[8]。本研究已初步提示,Paxillin表达主要与胃癌的转移密切相关,因此可以考虑把Paxillin蛋白作为早期转移的指标,并用此判断预后。此外,在今后的研究中我们可试用对此进行基因重组和基因敲除以阻断侵袭与转移的发生,并为药物开发和基因治疗带来信心。可以预见,Paxillin有望成为预测肿瘤侵袭转移、指导治疗及评估预后的有效指标。
参考文献
[1]David A,Michael C,Christopher E.The paxillin LD motifs.FEBS Letters,2002,513:114-118.
[2]许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准.中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.
[3]Turner CE.Paxillin interactions.Cell Sci,2000,113(23):4139-4140.
[4]Satrler M,Pisick E,Morrison PT,et al.Role of the cytoskeletal protein paxillin in oncogenesis.Crit Rev Oncog,2000,11(1):63-76.
[5]左万里,李海刚.非小细胞肺癌组织中CD44v6和Paxillin的表达及其与预后的关系.四川大学学报,2003,34(3):484-485.
[6]李海刚,谢德荣,黎洪浩,等.肝细胞癌Paxillin和VEGF的表达及其临床意义.中国肿瘤临床,2004,31(7):412-413.
[7]张诗武,刘岩雪,赵秀兰,等.100例伴转移的结直肠癌多因素预后分析.天津医科大学学报,2004,10(4):535-538.
[8]汤钊猷.现代肿瘤学.上海医科大学出版社,2000:850-856.