miR-155调控巨噬细胞炎症反应和脂质摄取的作用及机制

来源 :细胞与分子免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:li5815736
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目的研究miR-155在调控巨噬细胞炎症反应及脂质摄取中的作用及机制。方法使用(0、25、50、100)μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞24 h和50μg/m L ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,应用实时定量PCR检测细胞miR-155的水平;将细胞分为对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/过氧化物酶体增殖物激活受体γ-短发夹RNA(PPARγ-shRNA)组。上述细胞样本用油红O染色观察细胞内脂滴沉积、Filipin染色检测细胞ox-LDL摄取情况,胆固醇检测试剂盒检测细胞总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,实时定量PCR分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平;按实验目的,分别观察miR-155拮抗物(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组)、miR-155模拟物(阴性对照组、miR-155模拟物组)、shRNA干涉PPARγ(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/PPARγ-shRNA组)对RAW264.7细胞中ox-LDL刺激的作用机制,Western blot法检测磷酸化的信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)、PPARγ、CD36和核因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白水平。结果随着ox-LDL剂量和处理时间的增加,miR-155的表达水平逐渐升高;油红O染色、胞内胆固醇含量检测、Filipin染色结果显示,ox-LDL/miR-155拮抗物组油红染色相对吸光度(A)值、TC和FC含量、Filipin的平均荧光强度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL组、ox-LDL/阴性对照组;同样地,ox-LDL/PPARγshRNA组油红O染色A值、TC和FC含量、Filipin的平均荧光强度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL组、ox-LDL/shRNA阴性对照组;ox-LDL/miR-155拮抗剂组中p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表达低于ox-LDL组、ox-LDL/阴性对照组,miR-155模拟物组p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表达高于阴性对照组,ox-LDL/PPARγshRNA组中p-STAT3、CD36和NF-κBp65的蛋白表达较ox-LDL/shRNA阴性对照组的表达水平较ox-LDL组显著降低。结论 miR-155通过调控PPARγ,影响STAT3/NF-κB信号通路及CD36的表达,进而影响巨噬细胞的炎症反应和胆固醇代谢。
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