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目的
探讨MicroRNA-126对人肝细胞糖代谢功能影响的机制。
方法以来源于人肝脏的永生非肿瘤细胞系––张氏肝细胞为研究对象,分为6组,分别转染MicroRNA-126类似物与MicroRNA-126抑制物及其相应的阴性对照序列,并设正常对照组和脂质体Lipofectamine 2000组。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后各组细胞中MicroRNA-126的相对表达量,用Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇激酶p85β(PIK3R2)、蛋白激酶B2(Akt-2)、磷酸化Akt-2(P-Akt-2)的蛋白表达水平。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。
结果RT-PCR检测结果显示:MicroRNA-126类似物转染组中MicroRNA-126的相对表达量明显高于正常对照组(799.70±66.46比1.00±0.00,t=20.82,P<0.05)。MicroRNA-126类似物转染组细胞中IRS-1、PIK3R2的蛋白表达水平较正常对照组明显降低(分别为0.41±0.04比1.09±0.02、0.41±0.03比0.89± 0.01,t=- 25.53、- 26.63,均P<0.05)。各组间Akt-2的相对表达量差异无统计学意义(F=0.35,P> 0.05)。MicroRNA-126类似物转染组Akt-2的磷酸化水平(P-Akt-2/Akt-2)较正常对照组明显降低(0.53±0.07比0.88±0.09,t=-5.298,P<0.05)。
结论MicroRNA-126通过抑制IRS-1/PIK3R2/Akt-2胰岛素信号传导通路影响人肝细胞的糖代谢。