【摘 要】
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目的: 构建肽抗生素hPAB-β基因多拷贝串联体重组质粒,实现目的基因串联产物在大肠杆菌中的高效表达. 方法:以表达质粒pQE-32为载体,利用同裂酶Pst Ⅰ与Ava Ⅲ能产生相同粘端
【机 构】
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第三军医大学基础医学部微生物学教研室
【基金项目】
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国家科学基金，军队重点项目，国家高技术研究发展计划(863计划)
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目的: 构建肽抗生素hPAB-β基因多拷贝串联体重组质粒,实现目的基因串联产物在大肠杆菌中的高效表达. 方法:以表达质粒pQE-32为载体,利用同裂酶Pst Ⅰ与Ava Ⅲ能产生相同粘端的特性,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等操作,构建含不同数目hPAB-β基因的串联体.对获得的重组菌用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达,Tricine-SDS-PAGE观察串联体融合蛋白的表达情况. 结果: 构建了一至八拷贝的串联体重组质粒,经酶切、DNA测序分析表明,各串联体的DNA序列及阅读框完全正确.Trici
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