探讨miR－143靶向K－ras基因对宫颈癌细胞HeLa增殖的调控作用机制。
方法选取宫颈癌细胞系HeLa，分别转染miR－143模拟物和模拟物对照，采用实时荧光PCR法检测HeLa细胞中miR－143的表达。将荧光素酶报告载体与miR－143模拟物共转染，采用荧光素酶活性实验验证miR－143对HeLa细胞的靶向作用。以miR－143模拟物、miR－143模拟物对照以及miR－143模拟物＋K－ras基因分别转染HeLa细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖活性，采用Western blot法检测各组细胞中K－ras蛋白的表达。选取5例人宫颈癌组织标本和宫颈上皮内瘤变组织样本，采用实时荧光PCR法检测miR－143的表达，采用Western blot法检测K－ras蛋白的表达。
结果实时荧光PCR检测结果显示，转染miR－143模拟物组宫颈癌HeLa细胞中miR－143的表达水平为3.31±0.45，明显高于阴性对照组(0.97±0.22, P<0.05)。双荧光素酶活性检测结果显示，miR－143模拟物可明显抑制野生型K－ras报告载体的荧光素酶活性，但对突变型K－ras报告载体的荧光素酶活性并无明显的抑制作用。MTT法检测结果显示，转染miR－143模拟物后，宫颈癌HeLa细胞的增殖活性较阴性对照组明显降低(P<0.05)；而转染miR－143模拟物＋K－ras基因后，宫颈癌HeLa细胞的增殖活性较单纯转染miR－143模拟物组明显提高(P<0.05)，但仍明显低于阴性对照组(P<0.05)。Western blot法检测结果显示，阴性对照组、miR－143模拟物组、miR－143模拟物＋K－ras组K－ras蛋白的表达水平分别为521.36±41.89、115.27±34.08和706.52±89.44，miR－143模拟物组K－ras蛋白的表达较阴性对照组明显降低(P<0.05)；miR－143模拟物＋K－ras组K－ras蛋白的表达较miR－143模拟物组和阴性对照组明显增高(P<0.05)。实时荧光PCR检测结果显示，人宫颈癌组织中miR－143的表达水平(0.32±0.06)明显低于人宫颈上皮内瘤变组织(0.93±0.17, P<0.05)；Western blot法检测结果显示，人宫颈癌组织中K－ras蛋白表达水平(584.39±72.34)明显高于人宫颈上皮内瘤变组织(114.23±25.82, P<0.05)。
结论在小样本宫颈癌组织中，miR－143呈现低表达，K－ras呈现高表达；而miR－143可通过靶向K－ras基因的表达抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。