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目的
探索特异性靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)T细胞的构建与制备方法，并研究其体外杀伤靶细胞的效果。
方法通过基因合成和分子克隆手段构建靶向CD19-CAR片段并将其插入pLenti6.3慢病毒载体，利用293FT悬浮细胞系包装慢病毒并转染人外周血单个核细胞来源的CD3＋ T细胞。通过流式细胞术鉴定转染效率，并通过实时无标记细胞分析法和细胞计数试剂盒8检测靶向CD19-CAR-T细胞体外杀伤效果。
结果获得了表达抗CD19的单链抗体基因的慢病毒，病毒滴度可达3.2×108噬斑形成单位/ml。经慢病毒转染的CD3＋ T细胞在体外培养14 d后，细胞扩增效率达(60.2±11.5)倍，靶向CD19-CAR-T细胞阳性率达90.57%。经检测，靶向CD19-CAR-T细胞均可有效杀伤CD19＋靶细胞。
结论建立了基于无血清悬浮细胞系的靶向CD19-CAR慢病毒包装系统，成功构建靶向CD19的CAR-T细胞，该细胞能特异性杀伤CD19＋肿瘤细胞。