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[摘 要]高效液相色谱法是药品测定中应用比较广泛的一种方法，其操作简单，结果准确，成本低廉，因此得到了业内人士的广泛青睐。盐酸林可霉素中林可霉素的含量测定，通常也是利用这个方法，本次试验就是利用高效液相色法对盐酸林可霉素预混剂含量进行测定，所使用的色谱柱为C18，柱温控制在25℃-30℃之间，分别取0.05mol/L硼砂溶液与甲醇及进行1：1的配比，检测波长为214nm。实验结果证明，高效液相色谱法能够快速准确将林可霉素在盐酸林克霉素中的含量测定出来，是可靠的测定方法。
[关键词]高效液相色谱法；盐酸林可霉素；可霉素
中图分类号：F868.2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）01-0326-01
引言
我国医药领域在科技的推动下，也有了翻天覆地的变化，人们以及动物对于药物的需求都在不断增加，并且对于药物质量的要求也越来越高。为了能够适应市场需求，做好药品测作，准确的掌握每一份药剂中药物的含量，是保障药品质量的前提，同时也是对人们以及动物的生命安全负责。文章首先介绍了盐酸林可霉素这种药品，进而将其测定过程分为几个方面进行了分析和研究，从而证明了目前所使用的高效液相色谱法的科学性和可行性。
一、盐酸林可霉素
盐酸林可霉素是一种窄谱抗生素，它的作用与红霉素基本一致，在革兰阳性球菌的治疗中有着十分显著地效果，特别对厌气菌、金葡菌及肺炎球菌有高效。其作用机制和红霉素相似，属抑菌剂。主要抑制细菌细胞蛋白质的合成，临床主要用于敏感菌引起的各种感染，如肺炎、脑膜炎、心内膜炎、蜂窝织炎、扁桃体炎、丹毒，疖及泌尿系统感染等。由于本品可进入骨组织中，和骨有特殊亲和力，故特别适用于厌气菌引起的感染及金葡菌性骨髓炎。如果将这种药品用在饲料中，那么可以达到助长的面对，尤其是在肉鸡以及肥猪的培育方面，这种药物的科学使用，能够降低成本，提高经济收益，在药品行业不断发展的新时期，各种药品监督机制也日渐完善，因此，为了能够达到质量标准与检测要求，利用科学的测定法对药品含量进行测定是非常必要的。
二、仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1100高效液相色谱化学工作站，Nova-pakC18色谱柱（3.9mm×150mm），UV—1201型紫外可见分光光度计FA-2004型电子天平超声波振荡器，型号：1200H林可霉素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0432-9506，含量85.4%）甲醇（山东禹王实业有限公司禹城化工厂生产）为色谱纯试剂硼砂（广东汕头市西陇化工厂）、磷酸（广州化学试剂二厂）均为分析纯试剂盐酸林可霉素注射液（哈药集团制药总厂，批号：090701，090702，090703）
三、方法与结果
1.色谱条件与系统适应性试验
色谱柱：Nova-pakCl8column色谱柱（3.9mm×150mm）；流动相：0.05mol/L硼砂溶液（用磷酸调节pH值至6.0）-甲醇（3：2）；流速：lm1/min；进样量：10μl；柱温：室温；理论；板数：2563；检测波长的确定：精密称取林可霉素对照品126.3mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.溶液的制备
2.1流動相的制备称取硼砂9.6g加适量蒸馏水溶解，置500ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，加分析纯85%的磷酸调节pH6.0，再用0.45μm的微孔滤膜过滤，以3：2的比例配成流动相，超声20min，即可。
2.2对照品贮备溶液制备精密称取林可霉素对照品126.3mg，置25ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，用0.45μm的微孔滤膜过滤，制成5.052mg/ml的对照品贮备液。
2.3对照品溶液制备
精密吸取对照品贮备液2.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即可。
3.含量测定方法
精密吸取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。再精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。结果按外标法计算。
4.线性范围与回归方程
精密量取对照品贮备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0m1，分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得0.2526、0.5052、1.0104、1.5156、2.0208mg/ml的溶液，分别进样10μl，记录色谱图。
5.精密度试验
取盐酸林可霉素注射液的供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样5次，每次10μl，测定林可霉素峰面积，并计算5次检测结果的相对偏差，RSD为0.85。试验结果表明该方法精密度较好。
6.稳定性试验
精密吸取上述供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，分别于0.2.4.6.8.10.12及24小时测定林可霉素峰面积，结果表明，供试品溶液中的林可霉素在24小时内稳定。
7.重复性试验
取批号为050730305的盐酸林可霉素注射液供试品5份，照2.2.4项下方法操作，制成供试品溶液，精密吸取上述供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，测定林可霉素峰面积，计算每份样供试品中林可霉素含量及测定的相对标准偏差，结果见表4。结果表明该方法重复性较好。
8.加样回收率试验
精密量取盐酸林可霉素注射液供试品溶液4ml，共五份，分别置10ml容量瓶中，再分别加入林可霉素对照品溶液4ml，加流动相稀释至刻度。照供试品含量测定项下方法操作，计算其回收率为97.2%。（RSD=1.65%），试验结果表明该方法回收率较好。
9.供试品含量测定结果
取三批盐酸林可霉素注射液，照2.1.4项下制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl进样，记录色谱图，按外标法计算含量，结果见表1。
以上三批盐酸林可霉素注射液中林可霉素含量为标示量的92.73%。
结论：
1.试验与05药典的方法进行比对，其流动相的效果较好，保留化学性稳定，并且成本低，准确度高，试验中没有使用高毒性，价格贵的乙腈，因此这个方法比较实惠，更加利于大规模生产的应用。
2.参照文献盐酸林可霉素的含量的测定方法，在这个之上采用了硼砂-甲醇不同配比不同比值的流动相，结果表明，在比值为3：2时，能够有效的将不同可霉素分开，并且再加入一定三乙胺后，其洗脱效果不好，进样10μl，45min内无色谱峰，但基线平稳。
3.我国的人们生活水平的日益提高，使其对于各种药品的要求也在不断增大，并且在市场经济以及国家政策的要求下，药品检测机制也更加完善，那么为了能够符合检测标准，满足市场需求，提高药品测定准确性，从而保障药品药性的可靠与稳定，是非常必要的。
参考文献
[1]耿志旺，刘蔚，刘茜，乐健.HPLC法测定丙泊酚注射液中乙二胺四乙酸二钠含量[J]. 药物分析杂志. 2011
[2]刁岩忠，韩继永，陈祥峰.HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中乙二胺四乙酸二钠的含量[J]. 药物分析杂志. 2011
[关键词]高效液相色谱法；盐酸林可霉素；可霉素
中图分类号：F868.2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）01-0326-01
引言
我国医药领域在科技的推动下，也有了翻天覆地的变化，人们以及动物对于药物的需求都在不断增加，并且对于药物质量的要求也越来越高。为了能够适应市场需求，做好药品测作，准确的掌握每一份药剂中药物的含量，是保障药品质量的前提，同时也是对人们以及动物的生命安全负责。文章首先介绍了盐酸林可霉素这种药品，进而将其测定过程分为几个方面进行了分析和研究，从而证明了目前所使用的高效液相色谱法的科学性和可行性。
一、盐酸林可霉素
盐酸林可霉素是一种窄谱抗生素，它的作用与红霉素基本一致，在革兰阳性球菌的治疗中有着十分显著地效果，特别对厌气菌、金葡菌及肺炎球菌有高效。其作用机制和红霉素相似，属抑菌剂。主要抑制细菌细胞蛋白质的合成，临床主要用于敏感菌引起的各种感染，如肺炎、脑膜炎、心内膜炎、蜂窝织炎、扁桃体炎、丹毒，疖及泌尿系统感染等。由于本品可进入骨组织中，和骨有特殊亲和力，故特别适用于厌气菌引起的感染及金葡菌性骨髓炎。如果将这种药品用在饲料中，那么可以达到助长的面对，尤其是在肉鸡以及肥猪的培育方面，这种药物的科学使用，能够降低成本，提高经济收益，在药品行业不断发展的新时期，各种药品监督机制也日渐完善，因此，为了能够达到质量标准与检测要求，利用科学的测定法对药品含量进行测定是非常必要的。
二、仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1100高效液相色谱化学工作站，Nova-pakC18色谱柱（3.9mm×150mm），UV—1201型紫外可见分光光度计FA-2004型电子天平超声波振荡器，型号：1200H林可霉素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0432-9506，含量85.4%）甲醇（山东禹王实业有限公司禹城化工厂生产）为色谱纯试剂硼砂（广东汕头市西陇化工厂）、磷酸（广州化学试剂二厂）均为分析纯试剂盐酸林可霉素注射液（哈药集团制药总厂，批号：090701，090702，090703）
三、方法与结果
1.色谱条件与系统适应性试验
色谱柱：Nova-pakCl8column色谱柱（3.9mm×150mm）；流动相：0.05mol/L硼砂溶液（用磷酸调节pH值至6.0）-甲醇（3：2）；流速：lm1/min；进样量：10μl；柱温：室温；理论；板数：2563；检测波长的确定：精密称取林可霉素对照品126.3mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.溶液的制备
2.1流動相的制备称取硼砂9.6g加适量蒸馏水溶解，置500ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，加分析纯85%的磷酸调节pH6.0，再用0.45μm的微孔滤膜过滤，以3：2的比例配成流动相，超声20min，即可。
2.2对照品贮备溶液制备精密称取林可霉素对照品126.3mg，置25ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，用0.45μm的微孔滤膜过滤，制成5.052mg/ml的对照品贮备液。
2.3对照品溶液制备
精密吸取对照品贮备液2.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即可。
3.含量测定方法
精密吸取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。再精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。结果按外标法计算。
4.线性范围与回归方程
精密量取对照品贮备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0m1，分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得0.2526、0.5052、1.0104、1.5156、2.0208mg/ml的溶液，分别进样10μl，记录色谱图。
5.精密度试验
取盐酸林可霉素注射液的供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样5次，每次10μl，测定林可霉素峰面积，并计算5次检测结果的相对偏差，RSD为0.85。试验结果表明该方法精密度较好。
6.稳定性试验
精密吸取上述供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，分别于0.2.4.6.8.10.12及24小时测定林可霉素峰面积，结果表明，供试品溶液中的林可霉素在24小时内稳定。
7.重复性试验
取批号为050730305的盐酸林可霉素注射液供试品5份，照2.2.4项下方法操作，制成供试品溶液，精密吸取上述供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，测定林可霉素峰面积，计算每份样供试品中林可霉素含量及测定的相对标准偏差，结果见表4。结果表明该方法重复性较好。
8.加样回收率试验
精密量取盐酸林可霉素注射液供试品溶液4ml，共五份，分别置10ml容量瓶中，再分别加入林可霉素对照品溶液4ml，加流动相稀释至刻度。照供试品含量测定项下方法操作，计算其回收率为97.2%。（RSD=1.65%），试验结果表明该方法回收率较好。
9.供试品含量测定结果
取三批盐酸林可霉素注射液，照2.1.4项下制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl进样，记录色谱图，按外标法计算含量，结果见表1。
以上三批盐酸林可霉素注射液中林可霉素含量为标示量的92.73%。
结论：
1.试验与05药典的方法进行比对，其流动相的效果较好，保留化学性稳定，并且成本低，准确度高，试验中没有使用高毒性，价格贵的乙腈，因此这个方法比较实惠，更加利于大规模生产的应用。
2.参照文献盐酸林可霉素的含量的测定方法，在这个之上采用了硼砂-甲醇不同配比不同比值的流动相，结果表明，在比值为3：2时，能够有效的将不同可霉素分开，并且再加入一定三乙胺后，其洗脱效果不好，进样10μl，45min内无色谱峰，但基线平稳。
3.我国的人们生活水平的日益提高，使其对于各种药品的要求也在不断增大，并且在市场经济以及国家政策的要求下，药品检测机制也更加完善，那么为了能够符合检测标准，满足市场需求，提高药品测定准确性，从而保障药品药性的可靠与稳定，是非常必要的。
参考文献
[1]耿志旺，刘蔚，刘茜，乐健.HPLC法测定丙泊酚注射液中乙二胺四乙酸二钠含量[J]. 药物分析杂志. 2011
[2]刁岩忠，韩继永，陈祥峰.HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中乙二胺四乙酸二钠的含量[J]. 药物分析杂志. 2011