【摘 要】
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为了建立一种用于猪细小病毒（Porcine parvovirus, PPV）的特异、灵敏、快速检测方法，试验根据GenBank发布的PPV基因序列保守区片段设计了一套带生物素标签的特异性引物和FITC探针，以pET28a-NS1重组质粒为阳性模板将环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术与侧向流动层析试纸（lateral flo
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2016YFD0500701）； 河南省农业科学院自主创新项目（210118009）；
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为了建立一种用于猪细小病毒（Porcine parvovirus, PPV）的特异、灵敏、快速检测方法，试验根据GenBank发布的PPV基因序列保守区片段设计了一套带生物素标签的特异性引物和FITC探针，以pET28a-NS1重组质粒为阳性模板将环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术与侧向流动层析试纸（lateral flow dipstick, LFD）相结合，建立了PPV-LAMP-LFD检测方法，对LAMP-LFD的反应温度、反应时间及胶体金标记FITC-mAb比例进行优化，分析该方法的敏感性和特异性，并检测其早期临床应用效果。结果表明：建立的PPV-LAMP-LFD检测方法最适反应温度为64℃,最佳反应时间为50 min;标记1 mL胶体金需要14μg FITC-mAb;该检测方法的最低检测限为1×10 copies/μL,比琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR灵敏度高19倍；对猪伪狂犬病毒（PRV）、蓝耳病病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪乙型脑炎病毒（JEV）和猪瘟病毒（CSFV）检测结果均呈阴性；早期临床应用显示可在猪感染PPV后4 h的血液中检出病毒。说明建立的PPV-LAMP-LFD检测方法具有灵敏、特异、快速、简便等优点。
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