牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dflhe88
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的 建立一种区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒感染株的双重荧光定量PCR方法。方法 分别以布鲁氏菌4型分泌系统中VirB8基因、VirB12基因序列设计2对引物及探针,优化实时荧光PCR反应体系及条件。以牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株、牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株、大肠杆菌、沙门氏菌基因组DNA进行Realtime-PCR扩增,评价该方法特异性。分别构建布鲁氏菌VirB12基因和VirB8基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行Realtime-PCR扩增,测定该方法的敏感性。结果 本方法具有良好的特异性,牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株基因组DNA同时出现VirB8基因与VirB12基因阳性扩增,牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株仅出现VirB8基因阳性扩增,大肠杆菌、沙门氏菌均未扩增出目的条带,对VirB8基因及VirB12基因片段阳性质粒的检测限分别为约10~2 copies/μL和10~3 copies/μL。该方法仅用于鉴别区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒株。结论 本研究建立的布鲁氏菌双重Realtime-PCR方法,具有良好的特异性和敏感性,为今后鉴别牛种布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗免疫牛与自然感染牛提供技术支撑。
其他文献
每一个人力资源从业者都在思考怎样更好地去适应后疫情时代所面临的诸多问题。由于人力资源三支柱刚好强调灵活、共享、线上、开放,于是几乎是一夜之间被提上了每个企业的人力资源改革日程。安徽企业也在积极探索人力资源改革模式,将传统的人力资源模式提升为现在的人力资源三支柱模式。着眼于后疫情时代背景下安徽人力资源现状,对安徽企业的人力资源业务合作伙伴模式现状存在的问题进行了分析和思考,以此来推动人力资源三支柱的
预应力超高性能混凝土结构可充分发挥预应力钢筋和超高性能混凝土的优点,具有一定的发展潜力。与普通混凝土和高强混凝土相比,超高性能混凝土通过添加大比例的矿物掺和料实现了超高的强度、极高的致密性,导致其在火灾下易发生爆裂。爆裂将造成超高性能混凝土构件截面削减,内部温度场不规则分布,受力钢筋裸露。而高强预应力钢筋在火灾下易发生应力松弛与高温蠕变,力学性能退化显著,导致构件承载力降低,难以满足预定耐火等级要
随着中国人口老龄化步伐的明显加快,空巢老人数量也在急剧攀升,子女们承担着养家的重担和忙于自己的事业,无暇照顾家里的老人,尤其是空巢老人,在缺少家人更多照顾的情况下,非常容易遭受室内外环境变化或空气污染等带来的危害。老年人由于身体机能退化导致经常跌倒,带来的伤害常常伴有流血、骨折、住院甚至死亡。环境变化、空气污染和跌倒严重影响着老年人的健康生活。基于以上背景,开发了一种便携可穿戴式老年人实时环境监测
建党百年标准化发展历程可以主要分为四个阶段:建党到新中国成立阶段、社会主义建设初步探索阶段、改革开放阶段、中国特色社会主义新时代阶段。基于标准化发展的四个阶段,初步总结了各阶段标准化发展的特点、实践经验等问题。中国共产党百年标准化建设积累了丰富经验,主要体现为:坚持以人民为中心为根本遵循、坚持各历史阶段的经济发展规律、坚持中国标准化战略的持续转型、坚持民族性和世界性相统一。
在云南省农业面源污染现状的基础上,分析了云南省在控制和治理农业面源污染中存在的问题,提出了完善相关政策法规、加深农业面源污染控制和治理方面研究、着力实施和推广生态环保的农业工程(技术)、提高农民教育程度和农业环保意识的对策。
为了分析四方金矿深部矿体由空场法转崩落法回采时,不同回采顺序引起的地压活动规律,应用FLAC3D建立数值模型,对该矿4种不同回采方案的位移、应力、塑性区的分布规律进行了研究。研究结果表明:回采方案一的最大垂直位移为3.7cm、最大拉应力为0.22MPa、塑性区变形量为240×104 m3,相对其他方案的最大值分别降低30.2%、59.3%、1.3%,为最优回采顺序方案,即从一分层北端→一分层中部和
大学体育教学是关系到学生身心健康、促进学生能力发展的重要课程。科学的评价方式有利于进一步提升体育教学的质量,增强体育教学的功能。该文基于对灰色系统理论和模糊评价的概念和内涵展开分析,通过调查确定体育教学质量评价相关的指标,采取层次分析法确定大学体育教学的评价标准权重,采取模糊评价结合灰色系统理论建立评价的模型,在此基础上提出促进体育教学质量的策略,从多个角度对课题展开研究,以期进一步增强评价对体育
目的 探究在高血压合并脑梗死患者的治疗中将健康宣教与强化护理进行联合实施对患者的影响效果。方法 此次研究工作选择在我院展开,以2019年3月至2021年3月期间接收的患者为例,人数为100例,均为高血压合并脑梗死患者,对患者展开不同护理干预,将100例患者采用平均分配法分为两组,组名称为对照组和研究组,分别给予常规护理和健康宣教联合强化护理,对比不同护理方法对两组患者血压水平和神经功能缺损评分、健
关心和重视人民群众来信来访工作,是中国共产党将“人本”情怀放在首位的突出表现,也是习近平新时代中国特色社会主义思想的价值指向。习近平关于人民信访工作重要论述以马克思主义哲学观为理论根基,以中国共产党人探索人民信访工作的优良传统和创新思想为直接依据,最终形成于习近平关于人民信访工作的生动实践中。坚定地坚持中国共产党对人民信访工作的领导,以人民为中心推进人民信访工作,让领导干部主动深入基层构成了习近平