【摘 要】
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为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体水平,本研究利用TGEV冻存液,通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560bp,将其酶切后连接到pET-32a载体,转化大肠杆菌
【机 构】
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南沙出入境检验检疫局; 华南农业大学兽医学院;
【基金项目】
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广东省省级科技计划项目(2015B020230009)
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为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体水平,本研究利用TGEV冻存液,通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560bp,将其酶切后连接到pET-32a载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。挑取转化成功的部分菌落进行PCR试验,将目的条带正确的菌落添加到LB培养基过夜培养,提取重组质粒并送测序。培养测序正确的菌液,利用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE试验,在约37ku位置有一明显的目的条带。利用自制猪传染性胃肠炎兔血清通过Western blotting试验检测纯化的重组蛋白,在37ku处可见一条带,表明此重组蛋白具有一定的免疫原性。本研究将有助于研究TGEV ELSIA检测试剂盒的组装并进行TGEV抗体水平的监测,为猪场免疫情况提供相应参考。
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