【摘 要】
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目的 探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点.方法 用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间.结果 CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×104/孔和0.
【机 构】
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南京中医药大学中医学院·中西医结合学院,江苏 南京210023
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目的 探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点.方法 用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间.结果 CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×104/孔和0.25×104/孔.CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×104/孔和0.5×104/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线.而当密度分别低于0.05×104/孔和0.1×104/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性.与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×104/孔或高于2×104/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义.而细胞密度为0.25×104/孔至1×104/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究.
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