【摘 要】
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目的:研究以小干扰RNA(siRNA)阻断Notch1、Notch2、Notch3和Notch4各亚型对支气管哮喘(哮喘)模型小鼠肺T细胞分化的影响，比较Notch各亚型在肺T细胞分化中的不同作用，探讨Notch信号通路与哮喘发病的关系。方法:本研究为实验研究。制作哮喘小鼠模型，从肺组织中分离T细胞。在培养过程中分别采用特异siRNA片段阻断Notch1、Notch2、Notch3和Notch4，经小鼠CD3和CD28单克隆抗体活化T细胞，采用逆转录-聚合酶链反应方法检测活化肺T细胞的Notch1、Not
【机 构】
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上海市第六人民医院金山分院呼吸科，上海 201599;复旦大学附属华东医院上海市老年医学研究所，上海 200040
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目的:研究以小干扰RNA(siRNA)阻断Notch1、Notch2、Notch3和Notch4各亚型对支气管哮喘(哮喘)模型小鼠肺T细胞分化的影响，比较Notch各亚型在肺T细胞分化中的不同作用，探讨Notch信号通路与哮喘发病的关系。方法:本研究为实验研究。制作哮喘小鼠模型，从肺组织中分离T细胞。在培养过程中分别采用特异siRNA片段阻断Notch1、Notch2、Notch3和Notch4，经小鼠CD3和CD28单克隆抗体活化T细胞，采用逆转录-聚合酶链反应方法检测活化肺T细胞的Notch1、Notch2、Notch3和Notch4的mRNA及Notch下游基因多毛和分裂增强子1 mRNA的表达，酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-5及干扰素γ(IFN-γ)水平。结果:各特异性siRNA分别成功阻断了Notch1、Notch2、Notch3和Notch4。Notch1和Notch2被阻断后活化肺T细胞产生了同向效应，培养上清中IL-4、IL-5的量较对照组降低(n P值均<0.05)，而IFN-γ的表达较对照组升高(n P0.05)。n 结论:不同的Notch亚型在哮喘的发病中有不同的作用，Notch1和Notch2可能起主要促进作用，siRNA阻断Notch1和Notch2可能成为哮喘基因治疗的新通路。“,”Objective:To investigate the effects of blocking Notch1, Notch2, Notch3, and Notch4 with siRNA on the differentiation of lung T cells in bronchial asthma (asthma) model mice, to compare the effects of different Notch subtypes in lung T cell differentiation, and to explore the relationship between Notch signaling pathway and the pathogenesis of asthma.Methods:This was an experimental study.T cells were isolated from the lung tissue of asthma model mice.During the culture process, specific siRNAs were used to block Notch1, Notch2, Notch3, and Notch4.Lung T cells were activated by mouse CD3 and CD28 monoclonal antibodies, and the expressions of Notch1, Notch2, Notch3, Notch4, and HES1 (one of Notch downstream genes) mRNA of activated T cells were detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction method.Meanwhile, interleukin-4 (IL-4), IL-5, and interferon-γ (IFN-γ) were measured in cell culture supernatants by ELISA.Results:Each specific siRNA successfully blocked Notch1, Notch2, Notch3, and Notch4.After Notch1 and Notch2 were blocked, the levels of IL-4 and IL-5 in the supernatant of activated lung T cells were lower than those in the control group (both n P<0.05) while the expression of IFN-γ was higher than that in the control group (n P0.05).n Conclusions:Different Notch subtypes play different roles in the pathogenesis of asthma, and Notch1 and Notch2 may play a major role in promoting asthma.Therefore, blocking Notch1 and Notch2 by siRNA may become a new pathway for gene therapy of asthma.
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