【摘 要】
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比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利
【机 构】
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中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,河南牧业经济学院动物科技学院,华中农业大学水产学院
【基金项目】
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中国水产科学研究院基本科研业务费(2015B03XK01);淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室2015年度开放课题(KF-2015-002);河南牧业经济学院2016年学术带头人(84000092);2017年度河南省科技攻关(51000888)
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比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Daniorerio)突变纯合个体和突变杂合个体进行检测,用野生型个体作对照;同时用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突变杂合个体进行了检测。结果表明:三种方法均能够区分突变杂合个体,其中T7核酸内切酶I检测法耗时最
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