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以邻硝基苯磺酰氯为柱前衍生试剂,RP-HPLC为分离手段,选用Lichrospher C18柱,15 mmol/L的磷酸盐溶液(pH5.0)和乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长230 nm,建立了柱前衍生-高效液相色谱法测定N-乙酰-DL-蛋氨酸和L-蛋氨酸的方法,所有组分于20min内洗脱结束.N-乙酰-DL-蛋氨酸和L-蛋氨酸在2.75～254 μmol//L范围内线性良好,检出限分别为153 nmol/L和55 nmol/L.加标回收率分别为101.1%和99.8%,相对标准偏差为1.4%和0.89%.本方法可用于酶法或固定化酶法制备蛋氨酸反应体系的跟踪分析.