【摘 要】
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目的:以脂多糖(LPS)刺激BV-2小胶质细胞的培养液上清作为条件培养基培养SH-SY5Y神经元,探究丹参酮ⅡA对内毒素诱导神经元坏死性凋亡的保护作用.方法:体外培养BV-2和SH-SY5Y细胞,用CCK8法确定丹参酮ⅡA保护SH-SY5Y的最大剂量;以不同浓度梯度LPS(0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2μg?mL-1)刺激BV-2细胞24 h后,取培养液上清50μL加入新鲜培养基50μL刺激SH-SY5Y细胞24 h,采用CCK8法测定细胞增殖力确定最佳LPS间接刺激剂量
【机 构】
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明远学园——基础医学拔尖学生培养基地(怀德班),四川大学华西基础医学与法医学院,四川 成都 610041;四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室,四川 成都 610041;四川大学华西医院神经外科
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目的:以脂多糖(LPS)刺激BV-2小胶质细胞的培养液上清作为条件培养基培养SH-SY5Y神经元,探究丹参酮ⅡA对内毒素诱导神经元坏死性凋亡的保护作用.方法:体外培养BV-2和SH-SY5Y细胞,用CCK8法确定丹参酮ⅡA保护SH-SY5Y的最大剂量;以不同浓度梯度LPS(0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2μg?mL-1)刺激BV-2细胞24 h后,取培养液上清50μL加入新鲜培养基50μL刺激SH-SY5Y细胞24 h,采用CCK8法测定细胞增殖力确定最佳LPS间接刺激剂量,并以Western blotting测定坏死性凋亡标记物MLKL水平;以上述条件培养基处理丹参酮ⅡA(0.2、1μM)预保护4 h后的SH-SY5Y细胞,分别采用CCK8法测定细胞增殖能力,Western blotting检测MLKL水平.结果:成功构建基于BV-2条件培养基的SH-SY5Y共培养系统;0.2μg?mL-1 LPS可明显降低SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),上调MLKL(P<0.05);丹参酮ⅡA(0.2、1μM)预保护4 h可明显增加SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),并下调MLKL(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA对LPS作用于小胶质细胞后对神经元造成的损伤具有明显的保护作用,其机制可能与下调坏死性凋亡相关.
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