【摘 要】
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为研究布鲁氏菌分泌蛋白BspA和BspB的作用，以布鲁氏菌S2308基因组为模板，根据GenBank登录的BspA和BspB基因序列设计引物，利用PCR扩增BspA和BspB基因片段，并将其克隆至pEGFP-N1载体，获得真核表达载体pEGFP-BspA和pEGFP-BspB。真核表达载体经酶切和测序分析鉴定后，利用LipofectamineTM2000脂质体转染至胚胎滋养层细胞（HPT-8），采
【基金项目】
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河南省高等学校重点科研项目（21A230015）； 河南省重点研发与推广专项（科技攻关）（212102310746）；
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为研究布鲁氏菌分泌蛋白BspA和BspB的作用，以布鲁氏菌S2308基因组为模板，根据GenBank登录的BspA和BspB基因序列设计引物，利用PCR扩增BspA和BspB基因片段，并将其克隆至pEGFP-N1载体，获得真核表达载体pEGFP-BspA和pEGFP-BspB。真核表达载体经酶切和测序分析鉴定后，利用LipofectamineTM2000脂质体转染至胚胎滋养层细胞（HPT-8），采用Western blot（WB）检测BspA和BspB蛋白的表达，应用ELISA试剂盒检测细胞因子的分泌水平，利用乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性水平。结果显示，BspA基因大小为576 bp,BspB基因大小为564 bp，真核表达质粒经限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ酶切验证正确，酶切产物经测序分析，显示与GenBank公布序列的同源性为100%;WB检测结果显示，pEGFP-BspA和pEGFP-BspB转染组分别在70 ku和68 ku处出现条带，与预期结果相符，表明BspA和BspB蛋白能在HPT-8细胞中表达；细胞因子检测结果显示，BspA和BspB蛋白可诱导HPT-8细胞分泌IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5；细胞毒性检测结果显示，BspA和BspB蛋白对细胞无毒性。综上，成功构建了真核表达载体pEGFP-BspA和pEGFP-BspB，证实其能在HPT-8细胞中表达，并能诱导细胞因子分泌。
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