【摘 要】
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目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用.方法 重组人转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠近端.肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1(0、1、5、10、15、
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目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用.方法 重组人转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠近端.肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1(0、1、5、10、15、20 μg/L)作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Numb的表达.采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响.结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin蛋白表达下调,α-SMA蛋白表达增高.Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍(P=0.024)、1.39倍(P=0.035)、1.45倍(P=0.025)和1.51倍(P=0.000).而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍(P=0.046)、1.54倍(P=0.011)、1.79倍(P=0.028),Numb mRNA分别为0 h的1.56倍(P=0.012)、1.82倍(P=0.008)、1.82倍(P=0.002);同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中.下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调(为Numb表达正常时的18.1%,P=0.004)、E-cadherin表达下调(为Numb表达正常时的2.19倍,P=0.004).结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化.
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