地克珠利对柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5表达的影响

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建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染鸡动物模型,收集获得E tenella第2代裂殖子,通过PCR扩增E tenella第2代裂殖子丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5(serine/threonine protein phosphatase type 5,EtPP5)基因编码序列,构建pET-28a-EtPP5表达质粒,转化至BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化表达蛋白并免疫BABL/c小鼠制备EtPP5抗血清.采用免疫荧光和Western-blot技术检测第2代裂殖子EtPP5蛋白的表达.结果 显示,30℃时,用1 mmol/L的IPTG诱导pET-28a-EtPP5表达的融合蛋白大多以包涵体形式存在.EtPP5主要分布在E.tenella第2代裂殖子的细胞质中,细胞核也有少量分布.经地克珠利处理后,E.tenella第2代裂殖子EtPP5蛋白表达降低了47.65% (P<0.01).提示,地克珠利可能通过作用EtPP5发挥抗球虫作用,这为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供了理论依据.
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