【摘 要】
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[目的]提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarctica lipase B,CALB）的温度稳定性及活性。[方法]基于CALB的结构信息进行了理性设计，最终获得脂肪酶基因calbTm,并构建了pPICZαA-CALBTm重组表达质粒并实现了在毕赤酵母中的高效表达。[结果]突变体酶CALBTm在摇瓶发酵72 h后酶活达到600 U/mL,且在50℃下保温3 h后仍保留74.8%的酶活；
【基金项目】
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国家重点研发计划专项（“医药与食品工业酶创制与催化”,2021YFC2100300）；
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[目的]提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarctica lipase B,CALB）的温度稳定性及活性。[方法]基于CALB的结构信息进行了理性设计，最终获得脂肪酶基因calbTm,并构建了pPICZαA-CALBTm重组表达质粒并实现了在毕赤酵母中的高效表达。[结果]突变体酶CALBTm在摇瓶发酵72 h后酶活达到600 U/mL,且在50℃下保温3 h后仍保留74.8%的酶活；此外，中间突变体酶Tm1和Tm2经摇瓶发酵后酶活分别为220 U/mL、170 U/mL,在50℃下保温3 h后酶活分别保留了73.9%、10%。通过对蛋白结构的分析发现，引入疏水性强的氨基酸和增加蛋白质三维空间中的氢键数量，能维持蛋白质构象的稳定，进而提高了脂肪酶的温度稳定性。[结论]成功设计并获得一种新型高活性、耐高温的脂肪酶CALB,其酶活达到了600 U/mL,与野生型CALB相比提高了10倍，同时温度稳定性也显著提升，在50℃保温3 h后酶活保留了74.8%,而野生型CALB在保温3 h后酶活仅保留5%。
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