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摘要[目的] 测定椰衣不同提取物的总酚含量，考察椰衣不同提取物的抗氧化活性。[方法] 采用不同极性的溶剂对椰衣粉的60%乙醇提物进行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等4个提取物，以清除l，l-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的能力评价椰衣提取物的抗氧化活性，并采用Folin-Ciocalteu法测定提取物中总酚含量。[结果] 椰衣各提取物均有不同程度的抗氧化能力，顺序为 正丁醇提取物>乙酸乙脂提取物>水提物>石油醚提取物。[结论] 椰衣不同提取物均具有抗氧化能力，其与酚类物质含量基本呈正相关，其乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有较强的抗氧化活性。
关键词 椰衣；提取物；抗氧化；总酚含量
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07389-02
为棕搁科椰子属，是热带地区主要油料作物，主要产于我国广东南部诸岛及雷州半岛、海南、台湾及云南南部热带地区，是海南岛特产之一。椰子具有极高的经济价值，全株各部分均有用途。在医药上椰子壳用于治疗杨梅疮、筋骨痛，熬膏外用于体癣、脚癣，椰肉用于治疗姜片虫病，椰子油用于治疗疥癣、冻疮、神经性皮炎，椰子液用于治疗心脏性水肿、口干烦渴[1]。到目前为止， 对椰子总酚含量和抗氧化活性的研究尚未见详细的报道。笔者在此对这方面问题进行了探讨，为椰子的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 研究对象。椰子，购买于海口市海南大学南门，海南大学园艺园林学院吴友根副教授鉴定为棕榈科植物椰子（Cocos nucifera Linn.）的果实。
1.1.2 主要仪器。UV-2550紫外可见分光光度计（日本SH IM ADZU公司）； BP211D电子分析天平（d：0.000 1 g，德国Sartorius公司）； DFY-200型粉碎机（浙江温岭市大德中药机械有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1.1.3 主要试剂。钨酸钠、钼酸钠、磷酸、盐酸、双氧水、硫酸锂等购自上海国药集团。没食子酸和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）购自美国Sigma公司。
1.2方法
1.2.1 提取物的制备。取粉碎过的干燥椰子外衣（椰衣）100.00 g，加入60%乙醇200 ml，提取3次，每次提取72 h，合并次提取液，减压浓缩至150 ml，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对浓缩液进行萃取，所得萃取液减压浓缩并蒸干待用[2]。
1.2.2 椰衣不同提取物总酚含量的测定[3]。
1.2.2.1Folin-Ciocalteu试剂的配制。称取20.00 g钨酸钠和5.00 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140.00 ml蒸馏水溶解，加入85% 磷酸溶液10.00 ml，浓盐酸50.00 ml，文火回流10 h，然后依次加入3.00 g硫酸锂及15.00 ml双氧水，摇匀，去除冷凝器，继续煮沸15 min，以去除多余的双氧水，溶液呈金黄色，冷却后，定容至250 ml，过滤后的滤液即福林酚试剂，置于棕色瓶中保存。
1.2.2.2线性关系考察。称取没食子酸0.007 5 g，用蒸馏水溶解并定容至50 ml，得浓度为0.15 mg/ml的标准液。准确吸取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 ml上述没食子酸溶液分别用蒸馏水稀释于10 ml，得没食子酸标准稀释溶液。分别取2.00 ml不同浓度的没食子酸标准稀溶液于10 ml的比色管中，加入2.00 ml福林酚试剂，混匀，在0.5～8 min内加入0.75 ml 7.5%的碳酸钠溶液，充分混合后用蒸馏水定容至刻度，放置2 h，于765 nm下测定吸光度，空白试剂做参比。以没食子酸在反应体系中的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
1.2.2.3椰衣粉总酚含量的测定。分别取石油醚提取物（石油醚相）、乙酸乙酯提取物（乙酸乙酯相）、水提物（水相）、正丁醇相提取物（正丁醇相）20 mg，加入20.00 ml蒸馏水溶解，稀释5倍，分别得到0.20 mg/ml样品100 ml，按照上述测定没食子酸标准曲线的方法，测定它们的吸光度，测定3次，根据公式计算得到总酚含量，取平均值。
1.2.3 椰衣提取物抗氧化能力的测定[4]。
1.2.3.1DPPH标准溶液的配制。精确称取DPPH 0.004 0 g，置于50 ml的容量瓶中，加入无水乙醇溶解定容后，得浓度为0.08 mg/ml，DPPH标准储备溶液。置于4 ℃冰箱中保存备用。
1.2.3.2样品对DPPH的清除能力的测定。分别准确称取50 mg石油醚相、乙酸乙酯相、水相、正丁醇相的样品用无水乙醇定容至50 ml，稀释10倍，得到0.10 mg/ml母液备用。分别移取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 ml于10 ml比色管中，用无水乙醇定容至刻度得到0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 mg/ml的样品稀溶液。分别从比色管取1.00 ml样品溶液置于试管中，再加入配好的DPPH溶液3.00 ml，充分混匀，室温避光保存30 min后在517 nm处测定吸光度，以无水乙醇为空白对照。每个试验重复3次，结果取平均值。清除DPPH的能力按下式计算，即DPPH的清除率d（%）=[1-（A1-A2）/A3]×100%，式中，A1为1.00 ml样品溶液3.00 ml DPPH溶液的混合液在517 nm处的吸光度；A2为1.00 ml样品溶液与3.00 ml无水乙醇混合液在517 nm处的吸光度；A3为1.00 ml无水乙醇和3.00 ml DPPH混合液在517 nm处的吸光度。
关键词 椰衣；提取物；抗氧化；总酚含量
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07389-02
为棕搁科椰子属，是热带地区主要油料作物，主要产于我国广东南部诸岛及雷州半岛、海南、台湾及云南南部热带地区，是海南岛特产之一。椰子具有极高的经济价值，全株各部分均有用途。在医药上椰子壳用于治疗杨梅疮、筋骨痛，熬膏外用于体癣、脚癣，椰肉用于治疗姜片虫病，椰子油用于治疗疥癣、冻疮、神经性皮炎，椰子液用于治疗心脏性水肿、口干烦渴[1]。到目前为止， 对椰子总酚含量和抗氧化活性的研究尚未见详细的报道。笔者在此对这方面问题进行了探讨，为椰子的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 研究对象。椰子，购买于海口市海南大学南门，海南大学园艺园林学院吴友根副教授鉴定为棕榈科植物椰子（Cocos nucifera Linn.）的果实。
1.1.2 主要仪器。UV-2550紫外可见分光光度计（日本SH IM ADZU公司）； BP211D电子分析天平（d：0.000 1 g，德国Sartorius公司）； DFY-200型粉碎机（浙江温岭市大德中药机械有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1.1.3 主要试剂。钨酸钠、钼酸钠、磷酸、盐酸、双氧水、硫酸锂等购自上海国药集团。没食子酸和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）购自美国Sigma公司。
1.2方法
1.2.1 提取物的制备。取粉碎过的干燥椰子外衣（椰衣）100.00 g，加入60%乙醇200 ml，提取3次，每次提取72 h，合并次提取液，减压浓缩至150 ml，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对浓缩液进行萃取，所得萃取液减压浓缩并蒸干待用[2]。
1.2.2 椰衣不同提取物总酚含量的测定[3]。
1.2.2.1Folin-Ciocalteu试剂的配制。称取20.00 g钨酸钠和5.00 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140.00 ml蒸馏水溶解，加入85% 磷酸溶液10.00 ml，浓盐酸50.00 ml，文火回流10 h，然后依次加入3.00 g硫酸锂及15.00 ml双氧水，摇匀，去除冷凝器，继续煮沸15 min，以去除多余的双氧水，溶液呈金黄色，冷却后，定容至250 ml，过滤后的滤液即福林酚试剂，置于棕色瓶中保存。
1.2.2.2线性关系考察。称取没食子酸0.007 5 g，用蒸馏水溶解并定容至50 ml，得浓度为0.15 mg/ml的标准液。准确吸取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 ml上述没食子酸溶液分别用蒸馏水稀释于10 ml，得没食子酸标准稀释溶液。分别取2.00 ml不同浓度的没食子酸标准稀溶液于10 ml的比色管中，加入2.00 ml福林酚试剂，混匀，在0.5～8 min内加入0.75 ml 7.5%的碳酸钠溶液，充分混合后用蒸馏水定容至刻度，放置2 h，于765 nm下测定吸光度，空白试剂做参比。以没食子酸在反应体系中的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
1.2.2.3椰衣粉总酚含量的测定。分别取石油醚提取物（石油醚相）、乙酸乙酯提取物（乙酸乙酯相）、水提物（水相）、正丁醇相提取物（正丁醇相）20 mg，加入20.00 ml蒸馏水溶解，稀释5倍，分别得到0.20 mg/ml样品100 ml，按照上述测定没食子酸标准曲线的方法，测定它们的吸光度，测定3次，根据公式计算得到总酚含量，取平均值。
1.2.3 椰衣提取物抗氧化能力的测定[4]。
1.2.3.1DPPH标准溶液的配制。精确称取DPPH 0.004 0 g，置于50 ml的容量瓶中，加入无水乙醇溶解定容后，得浓度为0.08 mg/ml，DPPH标准储备溶液。置于4 ℃冰箱中保存备用。
1.2.3.2样品对DPPH的清除能力的测定。分别准确称取50 mg石油醚相、乙酸乙酯相、水相、正丁醇相的样品用无水乙醇定容至50 ml，稀释10倍，得到0.10 mg/ml母液备用。分别移取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 ml于10 ml比色管中，用无水乙醇定容至刻度得到0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 mg/ml的样品稀溶液。分别从比色管取1.00 ml样品溶液置于试管中，再加入配好的DPPH溶液3.00 ml，充分混匀，室温避光保存30 min后在517 nm处测定吸光度，以无水乙醇为空白对照。每个试验重复3次，结果取平均值。清除DPPH的能力按下式计算，即DPPH的清除率d（%）=[1-（A1-A2）/A3]×100%，式中，A1为1.00 ml样品溶液3.00 ml DPPH溶液的混合液在517 nm处的吸光度；A2为1.00 ml样品溶液与3.00 ml无水乙醇混合液在517 nm处的吸光度；A3为1.00 ml无水乙醇和3.00 ml DPPH混合液在517 nm处的吸光度。