实时荧光PCR方法检测多种食源性致病菌的研究

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目的:应用实时荧光PCR技术(real time PCR)联合检测小肠结肠炎耶尔森菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157、副溶血弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。方法:针对小肠结肠炎耶尔森菌foxA基因、霍乱弧菌ompW基因、肠出血性大肠杆菌O157 rfbE基因、副溶血弧菌TLH基因、沙门氏菌ssaR基因、志贺氏菌ipaH基因、空肠弯曲菌hipo基因和结肠弯曲菌glyA基因,在其保守区域设计特异性引物和探针,检测多种病原菌的特异性和灵敏度,并对临床样本和模拟样本进行检测,联合鉴别多种食源性致病菌。结果:该方法特异性强,与单核细胞增生李斯特菌、普通变形杆菌、绿脓杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、轮状病毒A组、轮状病毒B组、轮状病毒C组、诺如病毒GⅡ、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒核酸无交叉反应;灵敏度高,检测阳性样品均可达102 copies/mL;检测30份临床样本和50份模拟样本,准确性100%。结论:多种食源性致病菌实时荧光PCR检测方法准确、可靠、操作简单,今后可以大规模加速多种食源性致病菌的检测。
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