【摘 要】
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泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用.为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(EtUb)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEtUb蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得多克隆抗体.用qPCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段EtUb基因的转录和蛋白质翻译水平.结果显示:EtUb基因在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中
【机 构】
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上海师范大学生命科学学院,上海200234;中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点开放实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点开放实验室,上海2
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泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用.为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(EtUb)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEtUb蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得多克隆抗体.用qPCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段EtUb基因的转录和蛋白质翻译水平.结果显示:EtUb基因在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的转录和翻译水平均高于未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子阶段;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要分布于子孢子和第二代裂殖子的顶端表面;抗体入侵抑制实验显示兔抗rEtUb-IgG能明显抑制子孢子入侵BHK细胞,浓度为300μg/mL时,抑制率达到36％;免疫共沉淀实验共筛选出10个与EtUb潜在互作的虫体蛋白,包括Myosin A、Microneme protein 3等.研究结果为深入研究EtUb基因在球虫中的功能奠定了基础.
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