【摘 要】
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目的 探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)对Ⅰ型干扰素免疫应答的调节作用.方法 基于新型冠状病毒PLpro利用MEGA7.0构建SARS-CoV-2 PLpro进化树,并进行同源性分析;PCR扩增PLpro基因,并克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-PLpro.转染293细胞,采用Western blot和间接免疫荧光试验验证pcDNA3.1-PLpro的表达.通过qRT-PCR分析PLpro对Poly(I:C)刺激下炎性细胞因子mR
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133002;中国农业科学院长春兽医研究所,吉林长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所,吉林长春130122;延边大学农学院,吉林延吉133002
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目的 探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)对Ⅰ型干扰素免疫应答的调节作用.方法 基于新型冠状病毒PLpro利用MEGA7.0构建SARS-CoV-2 PLpro进化树,并进行同源性分析;PCR扩增PLpro基因,并克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-PLpro.转染293细胞,采用Western blot和间接免疫荧光试验验证pcDNA3.1-PLpro的表达.通过qRT-PCR分析PLpro对Poly(I:C)刺激下炎性细胞因子mRNA表达的影响;双荧光素酶报告基因试验检测PLpro对IFN-β通路的影响.结果 SARS-CoV-2 PLpro蛋白序列与SARS PLpro相似性为82.7％,与蝙蝠冠状病毒PLpro相似性为96.8％.PCR扩增出PLpro目的 基因片段长度为957 bp,与预期相符合,并在293细胞中表达.PLpro抑制IFN-β荧光素酶活性,同时抑制Poly(I:C)刺激引起的IFN-α、IFN-β、IL-6 mRNA表达升高.结论 SARS-CoV-2的PLpro抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素免疫应答,为病毒逃逸宿主天然免疫反应提供有利条件.
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