【摘 要】
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目的 探讨胞浆过表达促凋亡因子Smac对胰腺癌细胞Panc-1化疗敏感性的影响.方法 应用RT-PCR获得SmaccDNA(不含线粒体定位序列),定向克隆入pEGFP-N1质粒载体中,经限制性酶切、PCR及测序鉴定.利用脂质体将pEGFP-N1/Smac重组体转染胰腺癌细胞株Panc-1,应用荧光显微镜检测Smac-EGFP绿色荧光融合蛋白表达;流式细胞仪测定顺铂、5-FU诱导的转染细胞凋亡率;四
【机 构】
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广东省深圳市南山人民医院中心实验室,广东,深圳,518052,广东省深圳市南山人民医院中心实验室,广东,深圳,518052,广东省深圳市南山人民医院中心实验室,广东,深圳,518052,广东省深圳市南
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目的 探讨胞浆过表达促凋亡因子Smac对胰腺癌细胞Panc-1化疗敏感性的影响.方法 应用RT-PCR获得SmaccDNA(不含线粒体定位序列),定向克隆入pEGFP-N1质粒载体中,经限制性酶切、PCR及测序鉴定.利用脂质体将pEGFP-N1/Smac重组体转染胰腺癌细胞株Panc-1,应用荧光显微镜检测Smac-EGFP绿色荧光融合蛋白表达;流式细胞仪测定顺铂、5-FU诱导的转染细胞凋亡率;四甲基偶氮唑蓝(MIF)法检测细胞生长抑制率.结果 荧光显微镜下可见转染pEGFP-N1/Smac的细胞胞浆自发绿色荧光;在顺铂、5-FU作用下,N1/Smac转染组细胞凋亡率分别为(36.8±5.5)%、(47.6±6.9)%,明显高于未转染组(12.3±3.2)%、(19.2±4.7)%及空载体转染组(16.9±3.7)%、(22.5±5.8)%,其差异有统计学意义(P＜0.01).N1/Smac转染组细胞的生长抑制率亦明显高于未转染组及空载体转染组(P＜0.01).结论 胞浆过表达Smac活性分子可明显促进顺铂、5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,增强其对化疗药物的敏感性,为探索基于凋亡的胰腺癌治疗新策略提供实验依据。
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