梨叶片原生质体制备方法的建立及其基因瞬时转化试验

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以‘新梨7号’梨叶片为材料,探究影响原生质体分离的主要因素,制备高产优质的叶肉原生质体,并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶,0.1%果胶酶,0.4%离析酶,0.5 mol · L-1甘露醇,20 mmol · L-1 KCl,20 mmol · L-1 MES,10 mmol · L-1 CaCl2,1.0 g · L-1 BSA)中酶解12 h,可制备出产量为1.09 × 106 protopl · mL-1、活力为90%的原生质体。将1 ~ 2 μg · mL-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40% PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h,可以观察到GFP绿色荧光信号,转化率可达40%。
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