【摘 要】
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目的：基于磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬信号通路探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症（ITP）模型小鼠的作用机制。方法：50只BALB/c小鼠随机分为5组，分别为正常组，模型组，芪黄益气摄血方高、低剂量组和强的松组，每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）腹腔注射方法，建立ITP小鼠模型；注射APS后的第8天，各组分别灌胃给药，连续1
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.81704029）； 齐鲁卫生与健康杰出青年人才资助项目（No.鲁卫人才字[2020]3号）； 中央本级重大增减支项目（No.2060302）； 全国名老中医药专家刘持年传承工作室建设项目（No.国中医药人教发[2014] 20号）；
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目的：基于磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬信号通路探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症（ITP）模型小鼠的作用机制。方法：50只BALB/c小鼠随机分为5组，分别为正常组，模型组，芪黄益气摄血方高、低剂量组和强的松组，每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）腹腔注射方法，建立ITP小鼠模型；注射APS后的第8天，各组分别灌胃给药，连续14 d。检测外周血血小板（PLT）计数和血红蛋白（Hb）浓度变化，Elisa法检测血清血小板生成素（TPO）水平；分离脾脏、胸腺组织，称重，计算脾脏、胸腺指数；取胸骨做骨髓涂片，显微镜下进行骨髓巨核细胞分类；qRT-PCR法检测脾脏PI3K、AKT、mTOR、微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬关键分子酵母Atg6同素物（Beclin1）、P62 mRNA表达水平；Western Blot法检测脾脏p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、P62蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组小鼠外周血PLT计数、Hb及TPO水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01），脾脏和胸腺指数显著升高（P＜0.01），骨髓产板巨核细胞数显著减少（P＜0.01）；与模型组比较，芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组PLT计数、TPO水平显著升高（P＜0.01），脾脏指数和胸腺指数显著降低（P＜0.05,P＜0.01），骨髓产板巨核细胞数显著增加（P＜0.01），仅芪黄益气摄血方高剂量组Hb水平显著增加（P＜0.05）；与低剂量组比较，高剂量组PLT计数显著升高（P＜0.05）。qRT-PCR和Western Blot结果显示，与正常组比较，模型组小鼠脾脏PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著下调（P＜0.05,P＜0.01）,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平亦显著下调（P＜0.01），而LC3、Beclin1 mRNA和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平均显著上调（P＜0.01）；与模型组比较，芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组可显著上调脾脏PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01），显著上调p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01），显著下调LC3、Beclin1 mRNA和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01）。结论：芪黄益气摄血方可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制自噬，调节ITP免疫失耐受，从而发挥治疗作用。
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