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摘 要：目的：对食物中毒中所产生的致病菌进行检测。方法：根据国家标准，使用增菌培养基、选择性培养基、显色培养基和细菌生化鉴定系统分离和鉴定致病菌。结果：3份样均检出金黄色葡萄球菌，其中符合鉴定结果的概率为99%。结论：引起食物中毒的致病菌为金黄色葡萄球菌。
关键词：食物中毒;Baird-Parker琼脂平板;金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）属于革兰氏阳性菌，是常见的食源性致病菌，在自然界中广泛分布，通过空气及接触等传播，可对食品造成污染[1]，在条件适宜的情况下，会产生肠毒素，导致多种毒性蛋白的产生，诱发食物中毒及金黄色葡萄球菌类毒血症病症。金黄色葡萄球菌多存在于环境中以及人与动物的皮肤粘膜上，正常人的带菌率为30%～50%，人手上有14%～44%的带菌率。实验室研究中，开展食物中毒样本的病原菌检验已成为公共卫生问题的重要内容。本实验采用Baird-Parker琼脂平板和VITEK2全自动细菌生化鉴定仪相结合，开展病原菌病原学检验，可作为传染源控制及致病菌控制的依据
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 培养基与试剂
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC），缓冲蛋白胨水（BPW），7.5%NaCl肉汤，志贺氏菌增菌肉汤，科玛嘉沙门氏菌显色培养基、Baird-Parker琼脂平板、脑心浸出液肉汤、冻干血浆、XLD培养基、血琼脂平板、HE琼脂，北京路桥技术有限公司;GP革兰氏阳性细菌鉴定卡，购自美国bioMerieux.Ine;以上所用试剂均在有效期内[2]。
1.1.2 检验仪器
恒温隔水式培养箱（型号为HP-9270）;全自动细菌生化鉴定仪器（型号为VITEK2）;生物安全柜（型号为HFsafe-1200）。
1.2 菌株分离与鉴定
沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌的检测主要根据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB 4789.10—2016）及《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》（GB 4789.5—2012），应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪开展细菌生化鉴定。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查
迷客夏圆融二店是一家饮品店，2020年3月17日某家单位的10名员工在食用了迷客夏的饮品后相继出现呕吐、腹泻等症状。首发病例于3月17日13：40首次出现恶心、呕吐（3次）、腹痛、腹泻（3次）。该病例于17日14：40到九龙医院就诊。余9名病例的主要临床表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻和发热等。经抗菌素和输液治疗，现已转归良好。在中心接报完成后，开展现场调研，并进行采样干预，采集3种口味的朵朵云样品送检。
2.2 分离与增菌培养
3份样品称量后，分别添加至缓冲蛋白胨水（BPW）[3]，7.5%NaCl及志贺菌增菌肉汤中，均质，于36 ℃培养18 h;将完成增菌后的上述样品，分别接种到科玛嘉沙门氏菌显色平板、Baird-Parker琼脂平板、血琼脂平板、HE琼脂平板和XLD琼脂平板，于36 ℃培养24 h。结果显示，血琼脂平板上可见金黄色、圆形、不透明的可疑金黄色葡萄球菌菌落，Baird-Parker琼脂平板上可见圆形、光滑、凸起、湿润、直径为2 mm的可疑金黄色葡萄球菌菌落。在初分离培养中，由于样品中存在较少的菌量，会导致遗漏问题的产生，因此需要应用增菌培养物开展再分离培养。在血琼脂平板上，3份样品均呈现金黄色，形状为圆形，不透明，表明光滑，周围部位存在溶血圈的可疑菌落生长。在Baird-Parker琼脂平板上有圆形，光滑度较高，湿润度较高，凸起，直径为2 mm，颜色为灰色，边缘为淡色，周围存在浑浊带，外层部位存在透明带的可疑菌落生长。其余平板均无可疑菌落生长。
2.3 纯培养
在Baird-Parker琼脂平板上挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，并挑选血琼脂平板的可疑单菌落，置36 ℃，培养24 h。
2.4 初步鉴定
涂片镜检：3份样品的镜检结果均为革兰氏阳性球菌，以葡萄球形状排列，无芽孢，无荚膜。
2.5 血漿凝固酶试验鉴别
在血琼脂平板上挑选单个菌落，转接至5 mL脑心浸出液培养基试管中，于36 ℃培养24 h。吸取0.5 mL无菌生理盐水到冻干血浆西林瓶中，摇匀，再加入脑心浸出液培养物0.3 mL，混合均匀后于36 ℃培养，每隔0.5 h观察1次，
1 h后出现凝固现象，则为血浆凝固酶阳性。在血琼脂平板上进行纯培养物的挑选，用0.45%氯化钠液制备成 0.68麦氏浓度的菌悬液，接种GP革兰氏阳性细菌鉴定卡，生化鉴定应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪，鉴定结果为金黄色葡萄球菌，在3份样品中，金黄色葡萄球菌均存在一致性的生化结果。
3 结语
金黄色葡萄球菌肠毒素可耐受100 ℃煮沸30 min而不被破坏，并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用。若人们食用了金黄色葡萄球菌所污染的食物，可引起腹泻及呕吐等问题，诱发急性胃肠炎[4]。据郑艳敏等报道，2014—2018年苏州市217次食源性疾病暴发事件中，7.37%为金黄色葡萄球菌诱发可导致以呕吐和腹泻为主的急性胃肠炎症状[5]。本次食物中毒事件中极有可能存在食品间交叉污染的情况，应当予以重视，并对本地区的食品生产经营者加以引导。
参考文献
[1]刘保光，谢苗，董颖，等.金黄色葡萄球菌研究现状[J].动物医学进展，2021，42（4）：128-130.
[2]马敏.一起金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒调查分析[J].河南预防医学杂志，2020，31（12）：931-933.
[3]郑艳敏，滕臣刚，张梦寒，等.2014—2018年苏州市食源性疾病暴发事件流行特征分析[J].现代预防医学，2020，47（2）：215-218.
[4]郑剑，周伟艳，胡丹标，等.一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析[J].中国卫生检验杂志，2016，26（23）：3464-3466.
[5]仇广翠，孙明忠，金浩.220株金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析[J].中国实验诊断学，2016，20（2）：269-271.
关键词：食物中毒;Baird-Parker琼脂平板;金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）属于革兰氏阳性菌，是常见的食源性致病菌，在自然界中广泛分布，通过空气及接触等传播，可对食品造成污染[1]，在条件适宜的情况下，会产生肠毒素，导致多种毒性蛋白的产生，诱发食物中毒及金黄色葡萄球菌类毒血症病症。金黄色葡萄球菌多存在于环境中以及人与动物的皮肤粘膜上，正常人的带菌率为30%～50%，人手上有14%～44%的带菌率。实验室研究中，开展食物中毒样本的病原菌检验已成为公共卫生问题的重要内容。本实验采用Baird-Parker琼脂平板和VITEK2全自动细菌生化鉴定仪相结合，开展病原菌病原学检验，可作为传染源控制及致病菌控制的依据
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 培养基与试剂
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC），缓冲蛋白胨水（BPW），7.5%NaCl肉汤，志贺氏菌增菌肉汤，科玛嘉沙门氏菌显色培养基、Baird-Parker琼脂平板、脑心浸出液肉汤、冻干血浆、XLD培养基、血琼脂平板、HE琼脂，北京路桥技术有限公司;GP革兰氏阳性细菌鉴定卡，购自美国bioMerieux.Ine;以上所用试剂均在有效期内[2]。
1.1.2 检验仪器
恒温隔水式培养箱（型号为HP-9270）;全自动细菌生化鉴定仪器（型号为VITEK2）;生物安全柜（型号为HFsafe-1200）。
1.2 菌株分离与鉴定
沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌的检测主要根据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB 4789.10—2016）及《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》（GB 4789.5—2012），应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪开展细菌生化鉴定。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查
迷客夏圆融二店是一家饮品店，2020年3月17日某家单位的10名员工在食用了迷客夏的饮品后相继出现呕吐、腹泻等症状。首发病例于3月17日13：40首次出现恶心、呕吐（3次）、腹痛、腹泻（3次）。该病例于17日14：40到九龙医院就诊。余9名病例的主要临床表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻和发热等。经抗菌素和输液治疗，现已转归良好。在中心接报完成后，开展现场调研，并进行采样干预，采集3种口味的朵朵云样品送检。
2.2 分离与增菌培养
3份样品称量后，分别添加至缓冲蛋白胨水（BPW）[3]，7.5%NaCl及志贺菌增菌肉汤中，均质，于36 ℃培养18 h;将完成增菌后的上述样品，分别接种到科玛嘉沙门氏菌显色平板、Baird-Parker琼脂平板、血琼脂平板、HE琼脂平板和XLD琼脂平板，于36 ℃培养24 h。结果显示，血琼脂平板上可见金黄色、圆形、不透明的可疑金黄色葡萄球菌菌落，Baird-Parker琼脂平板上可见圆形、光滑、凸起、湿润、直径为2 mm的可疑金黄色葡萄球菌菌落。在初分离培养中，由于样品中存在较少的菌量，会导致遗漏问题的产生，因此需要应用增菌培养物开展再分离培养。在血琼脂平板上，3份样品均呈现金黄色，形状为圆形，不透明，表明光滑，周围部位存在溶血圈的可疑菌落生长。在Baird-Parker琼脂平板上有圆形，光滑度较高，湿润度较高，凸起，直径为2 mm，颜色为灰色，边缘为淡色，周围存在浑浊带，外层部位存在透明带的可疑菌落生长。其余平板均无可疑菌落生长。
2.3 纯培养
在Baird-Parker琼脂平板上挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，并挑选血琼脂平板的可疑单菌落，置36 ℃，培养24 h。
2.4 初步鉴定
涂片镜检：3份样品的镜检结果均为革兰氏阳性球菌，以葡萄球形状排列，无芽孢，无荚膜。
2.5 血漿凝固酶试验鉴别
在血琼脂平板上挑选单个菌落，转接至5 mL脑心浸出液培养基试管中，于36 ℃培养24 h。吸取0.5 mL无菌生理盐水到冻干血浆西林瓶中，摇匀，再加入脑心浸出液培养物0.3 mL，混合均匀后于36 ℃培养，每隔0.5 h观察1次，
1 h后出现凝固现象，则为血浆凝固酶阳性。在血琼脂平板上进行纯培养物的挑选，用0.45%氯化钠液制备成 0.68麦氏浓度的菌悬液，接种GP革兰氏阳性细菌鉴定卡，生化鉴定应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪，鉴定结果为金黄色葡萄球菌，在3份样品中，金黄色葡萄球菌均存在一致性的生化结果。
3 结语
金黄色葡萄球菌肠毒素可耐受100 ℃煮沸30 min而不被破坏，并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用。若人们食用了金黄色葡萄球菌所污染的食物，可引起腹泻及呕吐等问题，诱发急性胃肠炎[4]。据郑艳敏等报道，2014—2018年苏州市217次食源性疾病暴发事件中，7.37%为金黄色葡萄球菌诱发可导致以呕吐和腹泻为主的急性胃肠炎症状[5]。本次食物中毒事件中极有可能存在食品间交叉污染的情况，应当予以重视，并对本地区的食品生产经营者加以引导。
参考文献
[1]刘保光，谢苗，董颖，等.金黄色葡萄球菌研究现状[J].动物医学进展，2021，42（4）：128-130.
[2]马敏.一起金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒调查分析[J].河南预防医学杂志，2020，31（12）：931-933.
[3]郑艳敏，滕臣刚，张梦寒，等.2014—2018年苏州市食源性疾病暴发事件流行特征分析[J].现代预防医学，2020，47（2）：215-218.
[4]郑剑，周伟艳，胡丹标，等.一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析[J].中国卫生检验杂志，2016，26（23）：3464-3466.
[5]仇广翠，孙明忠，金浩.220株金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析[J].中国实验诊断学，2016，20（2）：269-271.