论文部分内容阅读
摘 要:目的:对食物中毒中所产生的致病菌进行检测。方法:根据国家标准,使用增菌培养基、选择性培养基、显色培养基和细菌生化鉴定系统分离和鉴定致病菌。结果:3份样均检出金黄色葡萄球菌,其中符合鉴定结果的概率为99%。结论:引起食物中毒的致病菌为金黄色葡萄球菌。
关键词:食物中毒;Baird-Parker琼脂平板;金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)属于革兰氏阳性菌,是常见的食源性致病菌,在自然界中广泛分布,通过空气及接触等传播,可对食品造成污染[1],在条件适宜的情况下,会产生肠毒素,导致多种毒性蛋白的产生,诱发食物中毒及金黄色葡萄球菌类毒血症病症。金黄色葡萄球菌多存在于环境中以及人与动物的皮肤粘膜上,正常人的带菌率为30%~50%,人手上有14%~44%的带菌率。实验室研究中,开展食物中毒样本的病原菌检验已成为公共卫生问题的重要内容。本实验采用Baird-Parker琼脂平板和VITEK2全自动细菌生化鉴定仪相结合,开展病原菌病原学检验,可作为传染源控制及致病菌控制的依据
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 培养基与试剂
亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC),缓冲蛋白胨水(BPW),7.5%NaCl肉汤,志贺氏菌增菌肉汤,科玛嘉沙门氏菌显色培养基、Baird-Parker琼脂平板、脑心浸出液肉汤、冻干血浆、XLD培养基、血琼脂平板、HE琼脂,北京路桥技术有限公司;GP革兰氏阳性细菌鉴定卡,购自美国bioMerieux.Ine;以上所用试剂均在有效期内[2]。
1.1.2 检验仪器
恒温隔水式培养箱(型号为HP-9270);全自动细菌生化鉴定仪器(型号为VITEK2);生物安全柜(型号为HFsafe-1200)。
1.2 菌株分离与鉴定
沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌的检测主要根据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10—2016)及《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》(GB 4789.5—2012),应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪开展细菌生化鉴定。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查
迷客夏圆融二店是一家饮品店,2020年3月17日某家单位的10名员工在食用了迷客夏的饮品后相继出现呕吐、腹泻等症状。首发病例于3月17日13:40首次出现恶心、呕吐(3次)、腹痛、腹泻(3次)。该病例于17日14:40到九龙医院就诊。余9名病例的主要临床表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻和发热等。经抗菌素和输液治疗,现已转归良好。在中心接报完成后,开展现场调研,并进行采样干预,采集3种口味的朵朵云样品送检。
2.2 分离与增菌培养
3份样品称量后,分别添加至缓冲蛋白胨水(BPW)[3],7.5%NaCl及志贺菌增菌肉汤中,均质,于36 ℃培养18 h;将完成增菌后的上述样品,分别接种到科玛嘉沙门氏菌显色平板、Baird-Parker琼脂平板、血琼脂平板、HE琼脂平板和XLD琼脂平板,于36 ℃培养24 h。结果显示,血琼脂平板上可见金黄色、圆形、不透明的可疑金黄色葡萄球菌菌落,Baird-Parker琼脂平板上可见圆形、光滑、凸起、湿润、直径为2 mm的可疑金黄色葡萄球菌菌落。在初分离培养中,由于样品中存在较少的菌量,会导致遗漏问题的产生,因此需要应用增菌培养物开展再分离培养。在血琼脂平板上,3份样品均呈现金黄色,形状为圆形,不透明,表明光滑,周围部位存在溶血圈的可疑菌落生长。在Baird-Parker琼脂平板上有圆形,光滑度较高,湿润度较高,凸起,直径为2 mm,颜色为灰色,边缘为淡色,周围存在浑浊带,外层部位存在透明带的可疑菌落生长。其余平板均无可疑菌落生长。
2.3 纯培养
在Baird-Parker琼脂平板上挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上,并挑选血琼脂平板的可疑单菌落,置36 ℃,培养24 h。
2.4 初步鉴定
涂片镜检:3份样品的镜检结果均为革兰氏阳性球菌,以葡萄球形状排列,无芽孢,无荚膜。
2.5 血漿凝固酶试验鉴别
在血琼脂平板上挑选单个菌落,转接至5 mL脑心浸出液培养基试管中,于36 ℃培养24 h。吸取0.5 mL无菌生理盐水到冻干血浆西林瓶中,摇匀,再加入脑心浸出液培养物0.3 mL,混合均匀后于36 ℃培养,每隔0.5 h观察1次,
1 h后出现凝固现象,则为血浆凝固酶阳性。在血琼脂平板上进行纯培养物的挑选,用0.45%氯化钠液制备成 0.68麦氏浓度的菌悬液,接种GP革兰氏阳性细菌鉴定卡,生化鉴定应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪,鉴定结果为金黄色葡萄球菌,在3份样品中,金黄色葡萄球菌均存在一致性的生化结果。
3 结语
金黄色葡萄球菌肠毒素可耐受100 ℃煮沸30 min而不被破坏,并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用。若人们食用了金黄色葡萄球菌所污染的食物,可引起腹泻及呕吐等问题,诱发急性胃肠炎[4]。据郑艳敏等报道,2014—2018年苏州市217次食源性疾病暴发事件中,7.37%为金黄色葡萄球菌诱发可导致以呕吐和腹泻为主的急性胃肠炎症状[5]。本次食物中毒事件中极有可能存在食品间交叉污染的情况,应当予以重视,并对本地区的食品生产经营者加以引导。
参考文献
[1]刘保光,谢苗,董颖,等.金黄色葡萄球菌研究现状[J].动物医学进展,2021,42(4):128-130.
[2]马敏.一起金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒调查分析[J].河南预防医学杂志,2020,31(12):931-933.
[3]郑艳敏,滕臣刚,张梦寒,等.2014—2018年苏州市食源性疾病暴发事件流行特征分析[J].现代预防医学,2020,47(2):215-218.
[4]郑剑,周伟艳,胡丹标,等.一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析[J].中国卫生检验杂志,2016,26(23):3464-3466.
[5]仇广翠,孙明忠,金浩.220株金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析[J].中国实验诊断学,2016,20(2):269-271.
关键词:食物中毒;Baird-Parker琼脂平板;金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)属于革兰氏阳性菌,是常见的食源性致病菌,在自然界中广泛分布,通过空气及接触等传播,可对食品造成污染[1],在条件适宜的情况下,会产生肠毒素,导致多种毒性蛋白的产生,诱发食物中毒及金黄色葡萄球菌类毒血症病症。金黄色葡萄球菌多存在于环境中以及人与动物的皮肤粘膜上,正常人的带菌率为30%~50%,人手上有14%~44%的带菌率。实验室研究中,开展食物中毒样本的病原菌检验已成为公共卫生问题的重要内容。本实验采用Baird-Parker琼脂平板和VITEK2全自动细菌生化鉴定仪相结合,开展病原菌病原学检验,可作为传染源控制及致病菌控制的依据
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 培养基与试剂
亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC),缓冲蛋白胨水(BPW),7.5%NaCl肉汤,志贺氏菌增菌肉汤,科玛嘉沙门氏菌显色培养基、Baird-Parker琼脂平板、脑心浸出液肉汤、冻干血浆、XLD培养基、血琼脂平板、HE琼脂,北京路桥技术有限公司;GP革兰氏阳性细菌鉴定卡,购自美国bioMerieux.Ine;以上所用试剂均在有效期内[2]。
1.1.2 检验仪器
恒温隔水式培养箱(型号为HP-9270);全自动细菌生化鉴定仪器(型号为VITEK2);生物安全柜(型号为HFsafe-1200)。
1.2 菌株分离与鉴定
沙门氏菌、志贺氏菌及金黄色葡萄球菌的检测主要根据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10—2016)及《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》(GB 4789.5—2012),应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪开展细菌生化鉴定。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查
迷客夏圆融二店是一家饮品店,2020年3月17日某家单位的10名员工在食用了迷客夏的饮品后相继出现呕吐、腹泻等症状。首发病例于3月17日13:40首次出现恶心、呕吐(3次)、腹痛、腹泻(3次)。该病例于17日14:40到九龙医院就诊。余9名病例的主要临床表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻和发热等。经抗菌素和输液治疗,现已转归良好。在中心接报完成后,开展现场调研,并进行采样干预,采集3种口味的朵朵云样品送检。
2.2 分离与增菌培养
3份样品称量后,分别添加至缓冲蛋白胨水(BPW)[3],7.5%NaCl及志贺菌增菌肉汤中,均质,于36 ℃培养18 h;将完成增菌后的上述样品,分别接种到科玛嘉沙门氏菌显色平板、Baird-Parker琼脂平板、血琼脂平板、HE琼脂平板和XLD琼脂平板,于36 ℃培养24 h。结果显示,血琼脂平板上可见金黄色、圆形、不透明的可疑金黄色葡萄球菌菌落,Baird-Parker琼脂平板上可见圆形、光滑、凸起、湿润、直径为2 mm的可疑金黄色葡萄球菌菌落。在初分离培养中,由于样品中存在较少的菌量,会导致遗漏问题的产生,因此需要应用增菌培养物开展再分离培养。在血琼脂平板上,3份样品均呈现金黄色,形状为圆形,不透明,表明光滑,周围部位存在溶血圈的可疑菌落生长。在Baird-Parker琼脂平板上有圆形,光滑度较高,湿润度较高,凸起,直径为2 mm,颜色为灰色,边缘为淡色,周围存在浑浊带,外层部位存在透明带的可疑菌落生长。其余平板均无可疑菌落生长。
2.3 纯培养
在Baird-Parker琼脂平板上挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上,并挑选血琼脂平板的可疑单菌落,置36 ℃,培养24 h。
2.4 初步鉴定
涂片镜检:3份样品的镜检结果均为革兰氏阳性球菌,以葡萄球形状排列,无芽孢,无荚膜。
2.5 血漿凝固酶试验鉴别
在血琼脂平板上挑选单个菌落,转接至5 mL脑心浸出液培养基试管中,于36 ℃培养24 h。吸取0.5 mL无菌生理盐水到冻干血浆西林瓶中,摇匀,再加入脑心浸出液培养物0.3 mL,混合均匀后于36 ℃培养,每隔0.5 h观察1次,
1 h后出现凝固现象,则为血浆凝固酶阳性。在血琼脂平板上进行纯培养物的挑选,用0.45%氯化钠液制备成 0.68麦氏浓度的菌悬液,接种GP革兰氏阳性细菌鉴定卡,生化鉴定应用VITEK2全自动细菌生化鉴定仪,鉴定结果为金黄色葡萄球菌,在3份样品中,金黄色葡萄球菌均存在一致性的生化结果。
3 结语
金黄色葡萄球菌肠毒素可耐受100 ℃煮沸30 min而不被破坏,并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用。若人们食用了金黄色葡萄球菌所污染的食物,可引起腹泻及呕吐等问题,诱发急性胃肠炎[4]。据郑艳敏等报道,2014—2018年苏州市217次食源性疾病暴发事件中,7.37%为金黄色葡萄球菌诱发可导致以呕吐和腹泻为主的急性胃肠炎症状[5]。本次食物中毒事件中极有可能存在食品间交叉污染的情况,应当予以重视,并对本地区的食品生产经营者加以引导。
参考文献
[1]刘保光,谢苗,董颖,等.金黄色葡萄球菌研究现状[J].动物医学进展,2021,42(4):128-130.
[2]马敏.一起金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒调查分析[J].河南预防医学杂志,2020,31(12):931-933.
[3]郑艳敏,滕臣刚,张梦寒,等.2014—2018年苏州市食源性疾病暴发事件流行特征分析[J].现代预防医学,2020,47(2):215-218.
[4]郑剑,周伟艳,胡丹标,等.一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析[J].中国卫生检验杂志,2016,26(23):3464-3466.
[5]仇广翠,孙明忠,金浩.220株金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析[J].中国实验诊断学,2016,20(2):269-271.