【摘 要】
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应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,辽宁出入境检验检疫局
【基金项目】
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国家质检总局资助项目(2005IK047)
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应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×HisTag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE分析和Western blot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原。
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