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采用玻璃针分离法,通过显微操作系统成功地分离到一个多花水仙(Narcissus tazetta L.2n=22)品种的中着丝粒单染色体,将分离到的单染色体放入0.2ml。Eppendorf管中,经去蛋白、Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3.0kb之间的DNA片段。用水仙基因组DNA标记作探针。与扩增产物进行Southern杂交,从而证明单染色体DNA确实已被成功地扩增。将第二轮PCR产物构建质粒文库,随机挑取90个重组子进行分析。发现插入片