【摘 要】
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为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的分子作用机制,探讨了在Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的技术路线,并对产物性质进
【机 构】
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军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物室Department of Cancer Biology M. D. Anderson Cancer Center Houston Texas US A;
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为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的分子作用机制,探讨了在Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的技术路线,并对产物性质进行初步研究.通过PCR从含有TIMP-1基因的pBS质粒获得了该基因的全长序列,构建了pPIC9/T1表达载体,电击法转化酵母,通过表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中.SDS-PAGE表明表达量高达40 mg/L培养上清.用免疫印迹法确定了产物的正确性;同时,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性.
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