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摘 要：建立奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判定标准，能够有效确定现有畜牧行业内部数据条件，并为奶牛饲养工作提供良好的病情判断依据，以确保后续奶制产品的质量优势满足市场环境需求，并确保奶牛健康程度具备可持续协调的前提。本文基于奶牛乳房炎早期诊断试剂盒实验特性展开分析，确定有效的染色条件和体细胞数目统计条件，通过完善的数据关联系统巩固判定标准，为后续划分区间的制定提供良好数据参照。
关键词：奶牛乳房炎；早期诊断；试剂盒判定；标准制定
奶牛乳房炎是当前奶牛生产环境中较为严重的疾病，不但动摇了相关企业在现有市场中的经济地位，更在产品质量上对食品安全造成不良影响。故而，在实际监测工作开展时，需要针对有效的判定标准进行构建，这样才能够确保奶牛市场环境稳定，并为后续畜牧业提供完善的功能统筹条件。
1 实验材料与仪器
实验材料：奶牛乳汁、甲基绿、碘化钾、冰醋酸、醋酸钠、美蓝染色液。
试验仪器：显微镜、灭菌管、玻片、温箱。
2 实验方法及结果
2.1 乳样试剂制备
在开展乳样采集工作中，应当针对牧场内部奶牛进行随机选取，通过专用的奶牛乳头药浴液进行清理，确保药液作用满足20～30s持续性条件下，使用一次性消毒纸巾对乳头和基部进行仔细擦干处理，而后在第三把奶中进行收集，并利用灭菌管进行承接。
2.2 显微镜计数方法
（1） 样本制备。充分摇匀乳样试剂，以便确保实际显微镜审查过程中具备深入分析的条件，而后使用微量加样器针对灭菌管内部乳汁进行精细提取，并将乳样滴在审查玻片中心，在通过无菌环境内部摊涂工作后，确定实验观察面积满足1cm2面积的乳膜审查条件。（2）样本处理。在制备好乳膜样品之后，应当将其置于37°C温箱环境内，确保已经干燥再利用二甲苯进行脱脂工作，待贯彻完全便置于95%浓度的乙醇溶液环境中，固定5～10min时间便可确保观察样本内部环境稳定，具备实际染色审查的条件。（3）样本染色。在玻片干燥处理之后，选用美兰染色液进行染色，确保渗透时间满足5min，再进行水洗，确保95%乙醇脱色数分钟，进行干燥处理，并展开显微镜观察。（4）观察计数。在生物显微镜观察环境中，可利用10倍目镜展开贯彻，确保视野环境中满足100个细胞数，再依据实际染色条件和相应系数进行分析，以确保每毫升乳液中体细胞数量。
2.3 试剂盒检测乳样颜色变化
以移液装置进行奶牛乳汁样品提取，而后再加入相对计量参数的裂解液，确保静置时间满足2min后，再通过甲基绿染色液进行染色工作，经由3min时间进行颜色变化记录，并确保相应记录条件的准确性。
2.4 制定有效的判断标准
将显微镜技术结果与甲基绿染色记录相结合，针对其中奶牛乳房炎早期诊断试剂盒变化进行比对，通过数据信息统一细胞数进行结果记录，另外将染色条件关系进行关联，从而依据其中功能条件确定有效的标准环境。
3 实验结果
3.1 显微镜计数与奶牛乳房炎染色变化的比对
显微镜计数结果与奶牛乳房炎早期诊断试剂盒颜色变化比对试验结果表明，体细胞数量变化区间对应着DNA染色的颜色变化梯度，体细胞数越多，绿色越深。其中，乳样体细胞数低于2.9×105个/mL时，对应显色颜色为浅蓝绿色；体细胞数在3.0×105～4.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为浅绿色；体细胞数在5.0×105～7.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为淡绿色；体细胞数在8.0×105～14.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为绿色体细胞数在15.0×105～49.9×105个/mL范围内，对应显色颜色为深绿色；体细胞数多于50.0×105个/mL时，对应显色颜色为墨绿色。
3.2 判定标准的制定
“-”为阴性，浅蓝绿色（体细胞数为0～2.9×105个/mL）；“±”为疑似，浅绿色（体细胞数为3.0×105～4.9×105个/mL）；“+”为弱阳性，淡绿色（体细胞数为5.0×105～7.9×105个/mL）；“++”为阳性，绿色（体细胞数为8.0×105～14.9×105个/mL）；“+++”为强阳性，深绿色（体细胞数为15.0×105-49.9×105个/mL）；“++++”为极强阳性，墨绿色（体细胞数多于50×105个/mL）。具体参见表1。
4 实验分析结论
4.1 奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准，是以目前检测奶牛是否患有乳房炎最为准确的显微镜直接计数法为设定标准依据，对同一样品同时用显微镜计数法和早期诊断试剂盒进行检测，比较体细胞数目多少和试剂盒染色深浅变化关系，确定早期诊断试剂盒的反应范围，从而制定出早期诊断试剂盒的判定标准。
4.2 本试验中，诊断试剂盒的颜色变化随着体细胞数量的变化而变化，而且呈正相关，随着乳汁中体细胞数量的增多，诊断试剂盒的颜色越变越深，符合规律性变化。
4.3 本试验制定的奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准是按照国际上通用的乳汁中体细胞数变化范围对应试剂盒的颜色变化程度而确定，其判断标准符合奶牛乳房炎的發生程度，与我国及国际对奶牛乳房炎的判断一致，符合奶牛乳房炎的诊断标准断标准，是以目前检测奶牛是否志有乳房炎最为准确的显微镜细胞计数法为设定标准依据，以染色颜色深浅与体细胞中DNA含量多少成正比、DNA含量多少与体细胞数量成正比的数量关系做对比，制定的奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判定标准。判定标准准确、划分区间细致，能够以明确的颜色变化准确快速判别奶牛乳房炎发生的程度。
该试剂盒判定结果准确反映体细胞数量变化区间，能够快速判定出奶牛乳房炎发生的程度。其标准规范、操作简便，判定迅速准确，便于携带和现场应用，为判定乳汁中体细胞数目、DNA数量及食品安全行业提供了一种经济、便捷、有效、现场、适时、及时的检测手段。适用于养殖场自主大规模批量检测筛查，也适用于平时对疑似隐性乳房炎奶牛随时判定。比对目前判断奶牛乳房炎结果最为准确的体细胞计数法，该试剂盒显色正确指示了体细胞数量变化关系，进而对应判断出奶牛的健康情况。同时它还规避了体细胞计数法（SCC）、PCR检测法和乳汁电导率检测法需要在实验室中检测的局限性，也规避了乳汁PH值检测法和乳汁电导率检测法的不准确性。
5 结束语
奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准的有效制定能够确保整体奶牛功能体系环境中具备有效审查的条件，并基于食品健康安全提供了更加丰富识别方法，并依据相应判断数据强弱，提供有效的治疗条件，这样才能够确保在后续企业经济发展环境中，具备可持续延伸的条件，并能够将自身经济财产损失有效降低。故而，在落实奶牛乳房炎判断标准过程中，应当基于功能环境确定检测条件，这样才能够应用到更加广泛的检测环境中，并为畜牧产业质量提升埋下扎实基础。
参考文献
[1]周庆民，徐馨，冯万宇，等.奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判定标准的制定[J].中国乳业，2017（7）：49-51.
[2]周庆民，徐馨，冯万宇，等.奶牛乳房炎早期诊断试剂盒的制备及稳定性评价[J].中国乳业，2018（1）.
[3]刘思当，程子龙，刘朋，等.一种隐性乳房炎试剂盒：，CN106248954A[P].2016.
[4]李佳，李亚娟，胡俊菁，等.奶牛乳房炎主要致病菌DNA不同提取方法的比较[J].中国兽医杂志，2017（2）：40-41.
关键词：奶牛乳房炎；早期诊断；试剂盒判定；标准制定
奶牛乳房炎是当前奶牛生产环境中较为严重的疾病，不但动摇了相关企业在现有市场中的经济地位，更在产品质量上对食品安全造成不良影响。故而，在实际监测工作开展时，需要针对有效的判定标准进行构建，这样才能够确保奶牛市场环境稳定，并为后续畜牧业提供完善的功能统筹条件。
1 实验材料与仪器
实验材料：奶牛乳汁、甲基绿、碘化钾、冰醋酸、醋酸钠、美蓝染色液。
试验仪器：显微镜、灭菌管、玻片、温箱。
2 实验方法及结果
2.1 乳样试剂制备
在开展乳样采集工作中，应当针对牧场内部奶牛进行随机选取，通过专用的奶牛乳头药浴液进行清理，确保药液作用满足20～30s持续性条件下，使用一次性消毒纸巾对乳头和基部进行仔细擦干处理，而后在第三把奶中进行收集，并利用灭菌管进行承接。
2.2 显微镜计数方法
（1） 样本制备。充分摇匀乳样试剂，以便确保实际显微镜审查过程中具备深入分析的条件，而后使用微量加样器针对灭菌管内部乳汁进行精细提取，并将乳样滴在审查玻片中心，在通过无菌环境内部摊涂工作后，确定实验观察面积满足1cm2面积的乳膜审查条件。（2）样本处理。在制备好乳膜样品之后，应当将其置于37°C温箱环境内，确保已经干燥再利用二甲苯进行脱脂工作，待贯彻完全便置于95%浓度的乙醇溶液环境中，固定5～10min时间便可确保观察样本内部环境稳定，具备实际染色审查的条件。（3）样本染色。在玻片干燥处理之后，选用美兰染色液进行染色，确保渗透时间满足5min，再进行水洗，确保95%乙醇脱色数分钟，进行干燥处理，并展开显微镜观察。（4）观察计数。在生物显微镜观察环境中，可利用10倍目镜展开贯彻，确保视野环境中满足100个细胞数，再依据实际染色条件和相应系数进行分析，以确保每毫升乳液中体细胞数量。
2.3 试剂盒检测乳样颜色变化
以移液装置进行奶牛乳汁样品提取，而后再加入相对计量参数的裂解液，确保静置时间满足2min后，再通过甲基绿染色液进行染色工作，经由3min时间进行颜色变化记录，并确保相应记录条件的准确性。
2.4 制定有效的判断标准
将显微镜技术结果与甲基绿染色记录相结合，针对其中奶牛乳房炎早期诊断试剂盒变化进行比对，通过数据信息统一细胞数进行结果记录，另外将染色条件关系进行关联，从而依据其中功能条件确定有效的标准环境。
3 实验结果
3.1 显微镜计数与奶牛乳房炎染色变化的比对
显微镜计数结果与奶牛乳房炎早期诊断试剂盒颜色变化比对试验结果表明，体细胞数量变化区间对应着DNA染色的颜色变化梯度，体细胞数越多，绿色越深。其中，乳样体细胞数低于2.9×105个/mL时，对应显色颜色为浅蓝绿色；体细胞数在3.0×105～4.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为浅绿色；体细胞数在5.0×105～7.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为淡绿色；体细胞数在8.0×105～14.9×105个/mL范围内时，对应显色颜色为绿色体细胞数在15.0×105～49.9×105个/mL范围内，对应显色颜色为深绿色；体细胞数多于50.0×105个/mL时，对应显色颜色为墨绿色。
3.2 判定标准的制定
“-”为阴性，浅蓝绿色（体细胞数为0～2.9×105个/mL）；“±”为疑似，浅绿色（体细胞数为3.0×105～4.9×105个/mL）；“+”为弱阳性，淡绿色（体细胞数为5.0×105～7.9×105个/mL）；“++”为阳性，绿色（体细胞数为8.0×105～14.9×105个/mL）；“+++”为强阳性，深绿色（体细胞数为15.0×105-49.9×105个/mL）；“++++”为极强阳性，墨绿色（体细胞数多于50×105个/mL）。具体参见表1。
4 实验分析结论
4.1 奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准，是以目前检测奶牛是否患有乳房炎最为准确的显微镜直接计数法为设定标准依据，对同一样品同时用显微镜计数法和早期诊断试剂盒进行检测，比较体细胞数目多少和试剂盒染色深浅变化关系，确定早期诊断试剂盒的反应范围，从而制定出早期诊断试剂盒的判定标准。
4.2 本试验中，诊断试剂盒的颜色变化随着体细胞数量的变化而变化，而且呈正相关，随着乳汁中体细胞数量的增多，诊断试剂盒的颜色越变越深，符合规律性变化。
4.3 本试验制定的奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准是按照国际上通用的乳汁中体细胞数变化范围对应试剂盒的颜色变化程度而确定，其判断标准符合奶牛乳房炎的發生程度，与我国及国际对奶牛乳房炎的判断一致，符合奶牛乳房炎的诊断标准断标准，是以目前检测奶牛是否志有乳房炎最为准确的显微镜细胞计数法为设定标准依据，以染色颜色深浅与体细胞中DNA含量多少成正比、DNA含量多少与体细胞数量成正比的数量关系做对比，制定的奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判定标准。判定标准准确、划分区间细致，能够以明确的颜色变化准确快速判别奶牛乳房炎发生的程度。
该试剂盒判定结果准确反映体细胞数量变化区间，能够快速判定出奶牛乳房炎发生的程度。其标准规范、操作简便，判定迅速准确，便于携带和现场应用，为判定乳汁中体细胞数目、DNA数量及食品安全行业提供了一种经济、便捷、有效、现场、适时、及时的检测手段。适用于养殖场自主大规模批量检测筛查，也适用于平时对疑似隐性乳房炎奶牛随时判定。比对目前判断奶牛乳房炎结果最为准确的体细胞计数法，该试剂盒显色正确指示了体细胞数量变化关系，进而对应判断出奶牛的健康情况。同时它还规避了体细胞计数法（SCC）、PCR检测法和乳汁电导率检测法需要在实验室中检测的局限性，也规避了乳汁PH值检测法和乳汁电导率检测法的不准确性。
5 结束语
奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准的有效制定能够确保整体奶牛功能体系环境中具备有效审查的条件，并基于食品健康安全提供了更加丰富识别方法，并依据相应判断数据强弱，提供有效的治疗条件，这样才能够确保在后续企业经济发展环境中，具备可持续延伸的条件，并能够将自身经济财产损失有效降低。故而，在落实奶牛乳房炎判断标准过程中，应当基于功能环境确定检测条件，这样才能够应用到更加广泛的检测环境中，并为畜牧产业质量提升埋下扎实基础。
参考文献
[1]周庆民，徐馨，冯万宇，等.奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判定标准的制定[J].中国乳业，2017（7）：49-51.
[2]周庆民，徐馨，冯万宇，等.奶牛乳房炎早期诊断试剂盒的制备及稳定性评价[J].中国乳业，2018（1）.
[3]刘思当，程子龙，刘朋，等.一种隐性乳房炎试剂盒：，CN106248954A[P].2016.
[4]李佳，李亚娟，胡俊菁，等.奶牛乳房炎主要致病菌DNA不同提取方法的比较[J].中国兽医杂志，2017（2）：40-41.