【摘 要】
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目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的
【机 构】
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中南大学中国医学遗传学国家重点实验室
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目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERretro,转染包装细胞PA317,收集含病毒颗粒的培养上清感染DU145细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到克隆,继续培养2个月形成稳定克隆。免疫印迹检测癌细胞内βcatenin及受其调控的靶基因cmyc和cyclinD1的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测βcatenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:免疫印迹和RTPCR结果显示,筛选得到的2个克隆中细胞内βcatenin表达水平下降;且克隆内cmyc,cyclinD1基因的表达下调;MTT检测显示,βcatenin表达抑制的细胞克隆吸光度值下降,这表明克隆内细胞数量减少,细胞增殖受到了抑制。结论:成功建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株。
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