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目的
建立利用煮沸血清可视化检测乙型肝炎病毒(HBV)的环介导等温扩增技术(LAMP)方法。
方法根据GenBank上提交的HBV的S基因序列比对后的相对保守区设计特异LAMP引物,分别用试剂盒法和煮沸法提取样本DNA。对反应条件进行优化,通过检测HBV标准毒株和临床样本来评价LAMP的特异性、灵敏度和抗干扰性,将实验结果和PCR进行比较。同时,对LAMP实验结果进行可视化检测。应用SPSS17.0软件进行一致性检验。
结果建立了最适LAMP反应条件,LAMP特异性高,没有产生非特异性扩增。无论使用哪种核酸提取方法,LAMP灵敏度均为10拷贝/管。染料羟基萘芬兰(HNB)的灵敏度和电泳检测、SYBR Green I效果相当,而不似染料SYBR Green I容易造成气溶胶污染。另外,以荧光定量PCR(FQ-PCR)为金标准,煮沸法的LAMP和FQ-PCR具有的一致性较好(Kappa = 0.762,P > 0.05)。然而,煮沸法的PCR和FQ-PCR的一致性较差(Kappa = 0.186,P < 0.05)。
结论LAMP在检测HBV感染中有优于PCR的特点,利用LAMP技术有利于在现场或基层医院检测HBV。