【摘 要】
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目的 人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达,纯化后活性分析.方法 克隆人类CCL3L1 cDNA,构建两种CCL3L1表达载体,获得两个CCL3L1融合蛋白,一个在BL21大肠杆菌表达
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目的 人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达,纯化后活性分析.方法 克隆人类CCL3L1 cDNA,构建两种CCL3L1表达载体,获得两个CCL3L1融合蛋白,一个在BL21大肠杆菌表达的GST-CCL3L1融合蛋白,另一个在S2果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白.同时克隆了pcDNA3.1-flag-CCR5表达载体,培养了稳定表达flag-CCR5的细胞株,进行人趋化因子CCL3L1活性分析.结果 成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白原核表达载体pGEX-4T和真核表达载体pMT/BiP/V5-His,免疫沉淀法检测和Western blot法分析His-CCL3L1蛋白在浓度1 nmol/L到50 nmol/L存在剂量依赖性,浓度50 nmol/L到100 nmol/L没有剂量依赖性.纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体.结论 成功表达了融合蛋白GST-CCL3L1和His-CCL3L1,果蝇细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性,为进一步制备CCL3L1单克隆和多克隆抗体及研究CCL3L1影响HIV-1感染的机制提供基础资料.
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