【摘 要】
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目的通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶
【机 构】
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安徽大学生命科学学院; 军事医学科学院生物工程研究所; 沈阳药科大学生命科学学院;
【基金项目】
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“重大新药创制”国家科技重大专项资助项目(2011ZX09102-001-30,2012ZX09102301-001)
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目的通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒(CMV)启动子,加入谷氨酰胺合成酶(GS)基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒(hCMV)启动子,构建载体pHGS1.0。将目的基因分别插入载体pHGS1.0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8(1-227)-VEGFR1domain2-IgG2(TV-IgG2)表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。
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