【摘 要】
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目的 通过基因工程技术获取肺炎链球菌自溶素(autolysin,LytA)和胆碱结合蛋白A(choline binding protein A,CbpA),探讨其对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断价值.方法 根据Gen
【机 构】
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大连医科大学临床免疫与微生物教研室
【基金项目】
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辽宁省科技厅自然科学基金资助项目;
论文部分内容阅读
目的 通过基因工程技术获取肺炎链球菌自溶素(autolysin,LytA)和胆碱结合蛋白A(choline binding protein A,CbpA),探讨其对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断价值.方法 根据GenBank中lytA和cbpA基因保守序列设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌基因组中扩增lytA和cbpA保守序列片段;经由IPTG诱导并通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA和CbpA;Western blot测定表达蛋白的抗体结合活性.以LytA和CbpA为抗原,建市ELISA反应模式测定感染小鼠血清中相应的IgG和IgM抗体,评价诊断价值.结果 成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/lytA和pET-32a(+)/cbpA,表达的重组蛋白LytA和CbpA具有较好的抗体结合活性.实验组小鼠(肺炎链球菌感染组)IgM和IgG类抗LytA抗体滴度高于对照组(止常对照组和乙型链球菌感染对照组),差异有统计学意义(P0.05).CbpA蛋白对感染小鼠诊断的敏感性较高(IgG:83.3%;lgM:75.0%),而LytA特异性较高(IgG:100%;IgM:100%).结论 协同利用重组蛋白CbpA诊断敏感性及LytA的特异性,对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断具有一定价值,为进一步用于临床检验奠定基础.
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