【摘 要】
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目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达.方法: 将PCR扩
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达.方法: 将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF 5端的231 bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH.将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL).Western blot检测表达产物免疫学活性.表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化.结果: 融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性.Western blot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性.融合蛋白的等电点为5.2.结论: 本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性.作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础.
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