【摘 要】
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目的为了检测BALB/C小鼠甲状腺促甲状腺激素受体(TSHR)表达,建立外标准法实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法取正常BALB/C小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进
【机 构】
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300070,天津医科大学寄生虫学教研室;300070,天津医科大学病理生理教研室
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目的为了检测BALB/C小鼠甲状腺促甲状腺激素受体(TSHR)表达,建立外标准法实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法取正常BALB/C小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,PCR产物经回收纯化后作为real-time PCR的标准品,制作标准曲线,优化反应条件使溶解曲线有特异扩增.检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/C小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达.结果建立的外标准法SYBR GREENⅠ实时定量RT-PCR方法可以灵敏检测到10 copies的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰;不同标准点批间变异系数范围为5.8%～14.3%(n=6).与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/C小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论外标准法实时定量RT-PCR具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,可精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平.
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