【摘 要】
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目的 研究高糖对小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖、成骨分化和糖代谢影响.方法 MC3T3-E1细胞予5.6 mmol/L(Con组)、25.0 mmol/L(HG组)葡萄糖浓度的α-MEM培养.CCK-8、Ki67免疫荧光检测细胞增殖,免疫荧光检测原纤毛;ELISA检测碱性磷酸酶(ALP)活力;Western blot检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、乙酰化α-tubulin(Ac-α-tubulin)、γ-tubulin、印度/音/沙漠刺猬信号分子(IHH,SHH,DHH)、神经胶质瘤相关癌基
【机 构】
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400016 重庆医科大学基础医学院
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目的 研究高糖对小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖、成骨分化和糖代谢影响.方法 MC3T3-E1细胞予5.6 mmol/L(Con组)、25.0 mmol/L(HG组)葡萄糖浓度的α-MEM培养.CCK-8、Ki67免疫荧光检测细胞增殖,免疫荧光检测原纤毛;ELISA检测碱性磷酸酶(ALP)活力;Western blot检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、乙酰化α-tubulin(Ac-α-tubulin)、γ-tubulin、印度/音/沙漠刺猬信号分子(IHH,SHH,DHH)、神经胶质瘤相关癌基因(Gli1/Gli2)、糖原合酶1(GYS1)、GluT4、磷酸果糖激酶(PFKM)、乙酰-CoA羧化酶α(ACACA)、糖原磷酸化酶(PYGL)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶1(PDP1)蛋白表达;茜素红染色检测矿化结节.结果 与Con组比较,HG组Ki67阳性率升高[(13.85±2.28)％vs(30.23±3.83)％,P<0.01],矿化结节形成受抑制(P<0.01),ALP酶活力降低(P<0.01),ALP、OPN、Gli2、IHH、SHH、GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、Ac-α-tubulin、γ-tubulin蛋白表达减低(P<0.05或P<0.01),PYGL、PDP1表达升高(P<0.05或P<0.01),原纤毛Ac-α-tubulin和γ-tubulin平均荧光强度降低(P<0.05或P<0.01).结论 高糖促进MC3T3-E1细胞增殖,损害糖代谢机制,破坏原纤毛,阻断Hedgehog信号,抑制成骨分化和矿化.
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