【摘 要】
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RT-PCR获取的血管形成素AngiogenincDNA片段,克隆入融合表达载体pRSETB中,表达213产物为N端融合了His6的融合蛋白,以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的10%.用8mol/L脲溶解包涵体
【机 构】
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第四军医大学生物技术中心,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
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RT-PCR获取的血管形成素AngiogenincDNA片段,克隆入融合表达载体pRSETB中,表达213产物为N端融合了His6的融合蛋白,以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的10%.用8mol/L脲溶解包涵体,利用His6与过渡态金属离子Ni2+高亲合力结合的性质,经Ni2+-NTA亲和树脂一步法纯化,获得纯度达98%以上His6-ANG融合蛋白,Western-blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带.重组蛋白复性后活性测定表明,在体外可促进鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成,并可降解tRNA.
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